目的:1.了解贵州省肺部感染病原需氧放线菌的分布特点。2.比较和分析16S rRNA、hsp65和rpoB基因在非结核分枝杆菌的种内分类研究的可靠性和稳定性。3.设计研发诺卡氏菌属鉴别诊断探针,提高临床诺卡氏菌感染的鉴别诊断水平。方法:1.收集贵州省及其他城市疑似肺部病原需氧放线菌感染的标本进行分离纯化并观察其生长情况。2.对诺卡菌及其它相近菌属的病原放线菌采用脑心浸出液培养基、对分枝杆菌属菌株采用PNB/TCH培养基进行培养和初步鉴定。3.提取分离收集菌株基因组,采用PCR-荧光探针及基因芯片法鉴定分枝杆菌属,并通过聚合酶链式反应扩增其16S rRNA基因并测序鉴定菌种。4.采用聚合酶链式反应扩增非结核分枝杆菌16S rRNA、hsp65及rpoB基因并进行测序鉴定菌种,用邻接法构建系统发育树,并以最大似然法进行验证。5.设计诺卡氏菌属细菌基于secA1基因的特异性分子信标探针,进行实时荧光定量PCR扩增并检测荧光信号。结果:1.在贵州省及其他城市共收集到43株肺部感染的病原需氧放线菌,其中诺卡氏菌11株、支气管戈登氏菌1株、非结核分枝杆菌31株。2.近年在贵州省临床上共发现肺部感染非结核分枝杆菌31例,非结核分枝杆菌的检出率为2.06%,其中鸟分枝杆菌有8株,胞内分枝杆菌有10株,龟/脓肿分枝杆菌共9株,瘰疬分枝杆菌、偶然分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌及蟾蜍分枝杆菌分别各1株;非结核分枝杆菌感染的阳性患者中,男女比例为1.21∶1;30-59岁年龄段感染率占61.29%;不同性别感染非结核分枝杆菌的高峰年龄段各不相同,女性为45-59岁,男性为75-89岁。3.在其他城市收集到肺部感染病原需氧放线菌11株,包括了Nocardia otitidiscaviarum 4株、Nocardia cyriacigeorgica及Nocardia farcinica各3株、Nocardia wallacei 1株。4.结合形态学及分子生物学鉴定,贵州省某医院误诊为结核分枝杆菌感染的病人痰液标本中分离出的病原分枝杆菌为支气管戈登氏菌。5.基于16S rRNA及hsp65基因构建的系统发育树在种间的层面上,均出现了A、B两个分化枝,自展值分别是63和64、78和97,而基于rpoB基因所得到的树状图在种间的层面上出现了A、B、C三个分枝且自展值分别是100、100、99。6.诺卡氏菌标准株secA1基因经实时荧光定量PCR扩增后可产生可检测荧光信号,而其他实验组、阴性对照实验组及空白对照组未检测到荧光信号。结论:1.目前贵州省临床实验室的微生物鉴定方法及试剂盒对戈登氏菌及其他相近菌属存在误诊情况。2.hsp65和rpoB基因在非结核分枝杆菌的种间鉴定分型上,较16S rRNA具有高度分辨率的优势,其中rpoB基因的准确度最高。3.本研究所设计的分子信标探针能够特异性地识别诺卡菌。