农杆菌介导的苦瓜遗传转化研究

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苦瓜(Momordica charantia L.)属葫芦科苦瓜属,为一年生蔓性草本植物。苦瓜果实中含有多种人体必须的氨基酸和微量元素,具有较高的营养价值,同时,苦瓜中含有的苦瓜苷等多种生物活性成分,具有降低血糖、抗菌、抗肿瘤以及提高人体免疫力的功效,因此,苦瓜做为一种蔬菜作物和药用植物有着重要的研究价值。本研究以南屿苦瓜等为试材,进行了离体再生体系的研究,并对农杆菌介导的遗传转化体系进行优化,成功获得了苦瓜转基因植株。主要结果如下: 1 苦瓜离体再生体系的建立 1) 贮藏期长的苦瓜种子易带菌,种子在1/2MS培养基上萌发率高。 2) 苦瓜子叶节可直接诱导出丛生芽,胚轴、真叶和愈伤组织诱导分化十分困难。 3) 建立以苦瓜子叶节为外植体的丛生芽直接诱导体系,在本研究中最适合的培养基为MS+6-BA3.0mg·L-1+IAA0.2mg·L-1,其丛生芽诱导率可达93.8%。 4) 苦瓜子叶呈浅绿色时最适合子叶节丛生芽的诱导。 5) 不同的基因型诱导率有一定的差异,一定浓度的6-BA和IAA的配比有利于丛生芽的诱导,高浓度的6-BA不利于丛生芽的伸长。 6) 苦瓜再生植株生根容易,在1/2MS+IAA0.2mg·L-1中可以获得较高的生根率,诱导的根形态正常。NAA诱导的不定根较粗短,根毛少。 2 根癌农杆菌介导遗传转化体系的优化 1) 苦瓜对卡那霉素不敏感,当浓度达到100mg·L-1时,子叶节丛生芽的诱导才会受到明显的抑制,头孢霉素和羧苄青霉素的浓度高达500mg·L-1时植物的生长才略受影响,浓度为500mg·L-1时可以抑制农杆菌的生长。 2) 苦瓜子叶节遗传转化条件的最佳配比为:苦瓜子叶节必须预培养3d左右,用OD600为0.3~0.5之间的菌液浓度浸泡,浸泡时间为10min,然后共培养3~4d。 3 发根农杆菌转化的苦瓜诱导毛状根 1) 菌株的类型对苦瓜子叶块生根能力十分重要的,发根农杆菌A对苦瓜的致根能力比发根农杆菌M强。 2) 外植体极性可能影响发根农杆菌的发根能力,经感染的苦瓜子叶块都仅在其下端中脉处产生毛状根,而中脉以外的组织极少产生毛状根。 3) 添加低浓度的NAA可以提高发根农杆菌的致根能力。 4) 本研究诱导的毛状根不能进一步发生分化。
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