几丁质酶作为生物指示物,常常用于农药水生生态风险评估,尤其是用于评估农药对甲壳类动物种群发育的影响。介形虫是浮游动物的重要组成部分,尤其是底栖节肢动物中最常见的物种。介形虫的种群丰度,在一定程度上,往往能够揭示出某一水域的健康状况。已有研究表明,水域中几丁质酶的含量与浮游节肢动物的种群丰度具有相关性。为了高效、便捷、专一的测量水域中介形虫几丁质酶含量,我们需要开发出能特异性识别介形虫几丁质酶的抗体。本文首先利用RT-PCR技术和RACE技术,从中华薄壳介体内克隆获得几丁质酶(Chitinase)基因的cDNA和gDNA全长序列。结果显示,中华薄壳介几丁质酶基因(DsChi)由10个外显子和9个内含子构成,开放阅读框为1821bp,编码606个氨基酸。再通过双酶切技术,将目的基因与表达载体(pET-30a(+))连接,成功构建出重组表达载体。重组表达载体转化大肠杆菌后,阳性菌株经IPTG诱导培养,表达得到了重组几丁质酶蛋白。以纯化的重组几丁质酶蛋白为免疫原,免疫新西兰白兔,成功制备了兔抗中华薄壳介重组几丁质酶抗血清,经过纯化得到了抗体球蛋白,经ELISA检测,抗体对重组几丁质酶蛋白的效价在128000以上。在抗体的特异性研究中,我们提取黑壳虾、掌肢新米虾、隆线溞、低额溞、水黾、东亚异痣蟌、羽摇蚊、中华剑水蚤、中华田螺、鲫鱼鱼苗十种生物体内粗酶液进行了交叉反应,结果显示该抗体能较好的识别介形虫体内的几丁质酶液,并且与其它生物交叉反应都在20%以下。因此本文制备的兔抗介形虫多克隆抗体可以应用于水体检测介形虫种群变化,研究结果为利用几丁质酶鉴定农药水生危害提供了一种较新的方法。