【摘 要】
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目的:结直肠癌是目前全球癌症相关死亡的第二大病因,目前可用于结直肠癌诊断的生物标志物敏感性及特异性较低,mi RNA的异常表达与结肠癌的进展密切相关,我们的研究旨在寻找新的循环micro RNAs（mi RNAs）作为CRC（Colorectal cancer,结直肠癌）诊断的生物标志物,并探讨其在CRC中的表达和调控作用。方法:1.通过GEO数据库在线工具GEO2R确定候选mi R-592。采用
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目的:结直肠癌是目前全球癌症相关死亡的第二大病因,目前可用于结直肠癌诊断的生物标志物敏感性及特异性较低,mi RNA的异常表达与结肠癌的进展密切相关,我们的研究旨在寻找新的循环micro RNAs（mi RNAs）作为CRC（Colorectal cancer,结直肠癌）诊断的生物标志物,并探讨其在CRC中的表达和调控作用。方法:1.通过GEO数据库在线工具GEO2R确定候选mi R-592。采用q RT-PCR方法检测结直肠癌患者和健康对照组血清mi R-592的表达。通过ROC（receiver operating characteristic curve,受试者工作特征曲线）确定血清mi R-592对结直肠癌的诊断价值。2.通过qRT-PCR检测mi R-592在结直肠癌组织和结肠癌细胞中的表达。分别用mi R-592抑制剂和对照组转染结肠癌细胞,通过q RT-PCR证实转染抑制效果;通过Western blot检测转染后SPARC的表达变化。分别通过CCK-8、Ed U和transwell试验证实mi R-592对结肠癌细胞增殖、侵袭和转移的影响。3.通过双荧光素酶实验验证SPARC是否为mi R-592在结直肠癌中的直接靶点。通过q RT-PCR检测SPARC在结直肠癌组织和细胞中的表达。分别用si SPARC和对照组转染结肠癌细胞,通过Western blot证实转染抑制效果;使用mi R-592抑制剂和si SPARC共转染结肠癌细胞,Western blot检测共转染后SPARC蛋白表达。分别通过CCK-8、Ed U和transwell试验检测转染后各组结肠癌细胞的增殖、侵袭。4.分别用对照组、si SPARC组及mi R-592抑制剂si SPARC共转染组转染结肠癌细胞。通过Western blot检测E-cadherin及N-cadherin在各组细胞中的表达。结果:1.我们发现mi R-592在CRC患者血清中表达明显上调,通过ROC分析显示血清mi R-592能够区分开CRC与HCs（Healthy controls,健康对照组）,其曲线下面积为0.844（95%CI:0.78-0.91,p<0.01）,敏感度为82.8%,特异度为78.0%。为了明确血清mi R-592是否可作为CRC诊断的生物标志物,我们检测了TNM I-II期CRC患者和HCs血清中mi R-592的表达水平,我们发现mi R-592在TNM I-II期CRC患者血清中也明显升高,ROC显示mi R-592可以将早期CRC患者与HCs区分开,其曲线下面积值为0.801（95%CI:0.73-0.88,p<0.01）,敏感度为78.6%,特异度为80.0%。2.与癌旁组织及正常结肠细胞相比,mi R-592在CRC组织和结肠癌细胞系中的表达均显著上调。抑制mi R-592的表达后结肠癌细胞SPARC的表达明显上升,抑制mi R-592的表达可以抑制CRC细胞的增殖侵袭及转移。3.我们通过双荧光素酶实验确定了SPARC是mi R-592在CRC中的直接靶点。和癌旁组织及正常结肠细胞相比,SPARC在CRC组织和结肠癌细胞系中的表达明显下降。mi R-592抑制剂转染结肠癌细胞后SPARC表达上升,抑制SPARC表达后细胞增殖侵袭能力增强,mi R-592抑制剂和si SPARC共转染结肠癌细胞后SPARC表达较si SPARC组上升。mi R-592抑制剂可以逆转si SPARC对结肠癌细胞增殖侵袭转移的促进作用。4.我们发现和对照组相比抑制SPARC表达后E-钙黏蛋白的表达下降,而N-钙黏蛋白的表达升高;和si SPARC组相比,抑制mi R-592表达后E-钙黏蛋白的表达升高,而N-钙黏蛋白的表达则下降。结论:血清mi R-592有望成为一种新的结肠癌诊断的潜在生物标志物。mi R-592是一种具有癌基因样作用的mi RNA,它直接抑制SPARC的表达使结肠癌细胞发生EMT进而促进细胞增殖侵袭及转移。
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