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第一部分:细菌纤维素的生物相容性评价目的:探讨天然高分子材料细菌纤维素(BC)与细胞共培养的生物相容性。方法:选取木醋杆菌并采用静置培养的方案制备细菌纤维素。将不同浓度的C2C12细胞和L929细胞分别与细菌纤维素材料在体外共培养,采用扫描电镜观察材料微结构,倒置相差显微镜观察细胞的生长及增殖情况,CCK-8比色法检测细胞增殖率。结果:扫描电镜显示细菌纤维素成有序纳米纤维结构,C2C12细胞和L929细胞在上面可以很好的生长、增殖,细胞状态为正常的梭型,形态没有明显变化;CCK-8检测细胞增殖率表明,两种细胞在材料上的相对增殖率均≥100%,细胞毒性(RGR)为0级。结论:细菌纤维素具有良好的生物相容性,对细胞有良好的粘附和增殖能力;为其做为组织工程支架材料奠定实验基础。第二部分:细菌纤维素联合BMP2的成骨效应目的:细菌纤维素(BC)是一种新型的生物材料,具有良好的理化性能和生物相容性,在组织工程上具有非常大的应用潜力,本实验利用体内外成骨诱导的方法来检测材料联合BMP2的成骨生物活性,评估细菌纤维素在骨组织工程中潜在价值,为进一步的临床应用提供实验依据。方法:用转化好的大肠杆菌表达并纯化BMP2蛋白。将BMP2加载到BC上,分为5个不同浓度,用C2C12细胞进行体外的成骨诱导,检测其对细胞的生长支持和成骨诱导的活性;同时将携带BMP2的BC材料,分为高浓度的H-BMP2/BC组和低浓度的L-BMP2/BC组,移植到SD大鼠皮下进行体内的异位成骨实验,分别于2周和4周后进行碱性磷酸酶(ALP)活性的检测和HE的组织切片观察,同时于第4周进行Von kossa的染色和钙沉积的检测。结果:(1)得到了纯度较高的活性BMP2。(2)体外实验表明,BC能够很好的支持C2C12细胞的生长和分化,不同浓度的BMP2对细胞的成骨分化影响不同,在一定范围内成存在剂量效应的关系。(3)在体内BC能够很好的被组织相容,在植入部位无急性炎症反应,无组织坏死发生。2周和4周后取出材料检测发现BMP2/BC实验组的ALP活性比对BC对照组显著增高,HE染色结果表明BMP2/BC组材料里面有新骨形成,BC对照组材料未见骨组织形成;H-BMP2/BC组的骨组织比L-BMP2/BC组的骨组织阳性染色更深、面积更大。4周后的Von kossa切片染色进一步证实BMP2/BC组新骨的形成,在BC对照组未见,H-BMP2/BC组比L-BMP2/BC组色泽更深;钙沉积的检测表明实验组的钙含量比对照组高,成骨效果比较显著。结论:细菌纤维素(BC)具有优良的生物相容性、理化性能以及良好的成骨效应。目前已成为材料科学尤其是生物材料研究的热点,可作为骨组织工程中一种新型生物材料进一步研究,为以后的临床应用奠定基础。