论文部分内容阅读
背景:类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)主要侵害小关节,具有对称性小关节慢性破坏的特点,晚期可进展为全身多个关节结构及功能受损。到目前为止,临床上治疗类风湿关节炎仍首选激素、免疫抑制剂及生物制剂等,但随着用药时间的延长,许多患者出现症状持续不缓解或者症状反复发作,这可能与多药耐药性(multidrug resistance,MDR)产生相关。其中,家族成员P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp),它发挥能量依赖泵的作用,可以把药物转运出效应细胞。IL-1β作为RA发病过程中的细胞因子,贯穿于疾病进展全阶段,加重炎症反应。我们前期研究成果已经证实在RA患者淋巴细胞中,随着IL-6、IL-17的浓度增加和时间延长,P-gp表达发生相应的变化,因此,我们通过观察RA中炎性细胞因子IL-1β对外周血淋巴细胞上的耐药蛋白P-gp的调节,进而探索对P-gp介导下的耐药性。目的:通过炎性细胞因子IL-1β来探索类风湿关节炎患者中IL-1β对外周血淋巴细胞耐药蛋白P-gp表达的影响。方法:收集初诊RA患者20例,采集上述RA患者外周血,离心血清,从细胞因子、基因表达以及蛋白水平上进行研究,用CBA试剂盒对研究对象的IL-1β水平进行定量分析。同时分离淋巴细胞,设立淋巴细胞培养组,包括空白对照组以及不同浓度IL-1β组,用RT-PCR的方法测P-gp mRNA的表达水平,罗丹明123实验(Rhl23荧光强度代表Rhl23的蓄积量,从而间接反映的P-gp功能)检测P-gp的功能。同样地,复测不同时间下P-gp的mRNA水平及功能。结果:1.CBA对初诊RA患者的IL-1β水平进行定量分析:将不同RA患者外周血的IL-1β水平与健康对照组IL-1β的数值相比较,RA患者IL-1β的水平增高(P<0.1)。同时将RA患者IL-1β的水平与P-gp mRNA的表达相比,两者之间目前尚无关联(P>0.1)。2.RT-PCR的方法测RA患者P-gp mRNA:在0ng、5ng、10ng的IL-1β作用下,P-gp mRNA表达水平不同(P<0.1)。进一步对0、24、48小时每个时间上的三个浓度的差异性进行分析,24和48小时的时间水平上不同浓度处理有差异(P<0.1)。在24和48小时时间水平上,5ng和0ng组相比升高(P<0.1)。随0、24、48小时的培养时间延长,P-gp mRNA表达水平有差别(P<0.1)。在同一浓度水平,5ng作用下24、48和0小时相比均升高(P<0.1),以48小时明显(P<0.05)。3.罗丹明123实验检测RA患者P-gp的功能:在0ng、5ng、10ng的IL-1β作用下,细胞内Rhl23的荧光强度无差别(P>0.1)。随着IL-1β刺激0、24、48小时时间延长,细胞内Rhl23的荧光强度逐渐减少(P<0.1)。在同一浓度水平,5ng作用下48和0小时相比减少(P<0.1)。结论:1.初诊RA患者外周血IL-1β较正常对照升高,与P-gp mRNA的表达尚无显著相关。2.在IL-1β特定的浓度和时间影响下,初诊RA患者外周血淋巴细胞P-gp mRNA的表达水平显著升高,表现出一定程度的浓度和时间相关,为探索IL-1β对P-gp作用下的多药耐药性做了研究基础。3.在IL-1β特定的浓度和时间影响下,初诊RA患者外周血淋巴细胞P-gp的功能显著增强,表现出一定程度的浓度和时间相关,同样地,为探索IL-1β对P-gp作用下的多药耐药性提供了理论依据。