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目的探讨冠心病患者外周血CD14+单核细胞基因组DNA总体甲基化水平以及特异基因TLR4(toll-like receptor4)启动子甲基化水平,为阐明冠心病患者外周血CD14+单核细胞的异常活化提供理论依据。方法密度梯度离心法和磁珠分选法分离20例冠心病患者和11例冠脉造影阴性对照的外周血CD14+单核细胞,抽提基因组DNA、总RNA和总蛋白,采用基因组总体甲基化定量试剂盒检测冠心病组和对照组DNA总体甲基化水平；采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)检测甲基化相关基因包括DNA甲基转移酶(DNAmethyltransferases, DNMTs)和甲基结合蛋白2(methyl binding protein2, MBD2)以及TLR4的mRNA表达水平；Westem-blot检测TLR4的蛋白表达水平；亚硫酸氢钠测序检测TLR4基因启动子的甲基化水平；ELISA法检测血浆中炎症因子肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)、IL-6及单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein1,MCP-1)的水平。结果与对照组相比,冠心病组(1)血浆炎症因子TNF-α、IL-6及MCP-1表达显著上调(P值分别为P=0.0274,P=0.0295,P=0.0026);(2) CD14+单核细胞DNA总体甲基化水平明显升高(P=0.0168);(3) DNMT1mRNA水平明显降低,而DNMT3A和DNMT3B的mRNA水平明显升高(P值分别为P=0.0185,P=0.0253和P=0.0089), MBD2mRNA水平明显降低(P=0.0373)(4)相关性分析表明,DNMT1和DNMT3B的mRNA表达水平与DNA总体甲基化水平呈明显正相关,MBD2的mRNA表达水平与DNA总体甲基化水平呈显著负相关,而表达升高的DNMT3A与总体甲基化水平没有明显相关性；(5) TLR4mRNA和蛋白表达水平显著上调(P=0.0296和P=0.0409)；(6)TLR4启动子核心调控区-370至-1163bp的4个CpG位点平均甲基化水平明显降低(P=0.0235),其中-421bp位点的甲基化水平明显降低(P=0.0107),-455bp,-631bp,-1086bp三个位点的甲基化水平与对照组相比均无显著性差异；(7)相关性分析表明,TLR4启动子区甲基化水平与TLR4mRNA表达水平呈显著负相关(r=-0.758,P=0.018);(8) TLR4mRNA表达水平与DNMT1mRNA表达水平呈显著负相关(r=-0.683,P=0.014)。结论(1)冠心病患者血浆TNF-α、IL一6及MCP-1表达显著上调,提示机体处于炎症状态以及单核细胞的活化状态；(2)冠心病患者外周血CD14+单核细胞基因组DNA呈总体高甲基化,可能是DNA甲基转移酶(DNMT1、DNMT3A和DNMT3B)和甲基结合蛋白MBD2共同作用的结果；(3)外周血CD14+单核细胞TLR4基因表达显著上调,可能是由TLR4基因启动子区的异常低甲基化所调控的,并且TLR4mRNA表达水平与DNMT1mRNA表达水平呈显著负相关,提示DNMT1可能介导了TLR4基因启动子区的低甲基化。