论文部分内容阅读
研究背景：近年来，有害赤潮在我国和世界各国沿海频繁发生，严重破坏了海洋生态系统的稳定，并威胁海洋渔业安全和人类健康。特别是部分赤潮藻产生的赤潮毒素直接威胁鱼类安全及人类身体健康。腹泻性贝毒毒素（DSP）作为一类主要的赤潮藻毒素，能通过食物链富集作用或直接引发人类中毒，产生呕吐，腹泻等症状。DSP的主要活性成分大田软海绵酸（OA）是由海洋甲藻产生的一种疏水性脂肪酸聚醚。已经证实OA具有诱导癌变和促进凋亡双重效应。有研究表明OA能够引起人肝癌细胞，人结肠癌细胞，人神经母细胞瘤细胞等癌细胞系凋亡。目前利用相关细胞系进行OA毒性检测并指导赤潮防治方面的研究报道较多。根据OA能够诱导癌细胞凋亡这一特点，本文选取了非OA靶器官瘤细胞系A549细胞作为研究对象，意在研究OA对A549细胞系是否同样具有凋亡诱导作用。本文通过研究大田软海绵酸对人肺腺癌细胞A549增殖的影响，并进行形态学观察及亚显微水平分析，最终确定OA对A549细胞系是否具有生长抑制作用并探讨其原因，以期在细胞水平上为肺癌治疗提供一定的理论基础，为肺腺癌的治疗寻求新的药物。研究方法：1. MTT法及台盼蓝拒染试验（TBET）进行细胞生长量的测定，分析OA对A549细胞增殖的影响。2. Giemsa染色法、苏木精-伊红染色法、倒置相差显微镜观察、吖啶橙染色法、H33258染色法等实验观察OA对A549细胞显微水平形态学方面的影响。3.透射电镜在亚显微水平观察A549细胞的变化情况。4.流式细胞术检测细胞周期变化情况。5.分光光度法测定Caspase酶活变化情况。研究结果：1. MTT实验及台盼蓝拒染试验结果显示：OA作用于A549细胞后，细胞数目呈剂量-时间依赖性减少，表明OA能抑制A549细胞的增殖。2.形态学实验观察发现：经34ng/mL及68ng/mL OA处理48h后，A549细胞部分细胞间接触消失，胞体变圆，膜皱缩，部分细胞悬浮脱离支持物，细胞核凝集破碎，产生凋亡小体，出现明显的细胞凋亡现象，且该现象有一定的剂量依赖性。3.细胞超微结构观察结果显示：细胞表面微绒毛消失，细胞内染色质凝集、弯曲，趋边呈新月形帽状结构，细胞内空泡化现象明显，可见清晰的凋亡小体。4. OA可以将A549细胞的细胞周期阻滞在G0/G1期，抑制细胞增殖。5. OA诱导引起的A549细胞凋亡可能是通过激活上游的Caspase-8，导致下游的Caspase-3激活，最终诱导细胞凋亡。目前，在世界范围内肺癌发病率和死亡率明显提高，已经成为全世界恶性肿瘤患者死亡的主要原因，是人类生命健康的一大威胁。以上实验结果表明：大田软海绵酸（OA）对人肺腺癌A549细胞增殖具有显著的抑制作用，OA引起的细胞凋亡现象是抑制细胞增殖的主要原因，在体内不会产生炎症反应，且细胞凋亡现象与OA浓度和作用时间成正相关，证明OA具有开发成为人肺腺癌治疗新药物的潜力。