目的:通过动物实验,观察益糖康对2型糖尿病大鼠血糖、胰岛素、血脂等糖脂代谢相关指标、肝脏组织病理变化、色素上皮衍生因子及PI3K/Akt和AMPK信号通路关键蛋白表达的影响;通过细胞实验,观察益糖康含药血清对胰岛素抵抗Hep G2细胞和3T3-L1细胞形态、活力、葡萄糖消耗量及细胞中PI3K/Akt和AMPK信号通路关键蛋白的影响,研究益糖康对糖尿病大鼠糖脂代谢的调节作用,对胰岛素抵抗的改善作用,并初步探讨其作用机制,旨在为中医药治疗糖尿病提供实验依据,努力探寻新的治疗靶点。材料与方法:论文一:SPF雄性SD大鼠60只,根据随机数字表法将大鼠分为正常对照组15只、高脂饮食组45只。正常对照组大鼠予普通饲料、高脂饮食组大鼠予高脂高糖饮食喂养。8周后,禁食12小时,腹腔注射链脲佐菌素构建T2DM大鼠模型。成模后根据大鼠血糖随机分为模型对照组15只,益糖康组15只,二甲双胍组15只。根据大鼠与人等效剂量换算公式,计算出大鼠的灌胃用量。造模成功后第2天开始,正常对照组和模型对照组予0.9%生理盐水10ml/kg/d灌胃,益糖康组予9.45ml/kg/d益糖康煎剂灌胃、二甲双胍组予9ml/kg/d二甲双胍溶液灌胃,每日1次,连续8周。每2周测量体重和血糖。干预结束后,ELISA法检测红细胞裂解液中Hb A1c含量和血浆中FINS含量,比色法检测血浆中TC、TG、LDL-C、HDL-C含量,HE染色法观察大鼠肝脏组织形态变化,高胰岛素-正葡萄糖钳夹实验检测胰岛素抵抗情况。论文二:实验动物、实验药品及动物的饲养、分组、给药方法同论文一。采用ELISA法检测各组大鼠血清、肝脏和脂肪中组织的PEDF含量、western-blot法检测各组大鼠肝脏组织中PI3K、Akt、GSK-3β蛋白及其磷酸化的表达水平、肝脏和脂肪组织中AMPK、ATGL蛋白及其磷酸化的表达水平、免疫荧光法检测肝脏组织中PI3K、Akt、GSK-3β、AMPK、ATGL磷酸化的表达水平。论文三:SPF雄性SD大鼠30只,采用随机数字表法将大鼠分为正常组10只、益糖康组10只、二甲双胍组10只。分别予生理盐水10ml/kg、益糖康煎剂18.9ml/kg、二甲双胍片溶液18ml/kg灌胃,每天1次,连续7天,制备空白血清及含药血清。建立胰岛素抵抗Hep G2细胞及3T3-L1细胞模型,并分别分成正常组、模型组、益糖康组、二甲双胍组、PEDF组,予不同浓度的药物进行干预。应用倒置显微镜观察细胞形态变化、CCK-8法检测细胞活力、葡萄糖酶法检测细胞葡萄糖消耗量,western-blot法检测细胞中PI3K、Akt、GSK-3β、AMPK、ATGL蛋白及其磷酸化的表达水平。结果:论文一:1.益糖康对T2DM大鼠的进食量、饮水量、小便量等方面具有调节作用。2.干预前,与正常对照组相比,各组大鼠体重均显著增加(P<0.01)。干预第2周和第4周后,益糖康组和二甲双胍组大鼠体重下降较模型对照组更为明显(P<0.01)。干预6周和8周后,模型对照组大鼠体重下降较益糖康组和二甲双胍大鼠更为明显(P<0.01、P<0.05)。随着干预时间的增加,益糖康组、二甲双胍组大鼠体重下降逐渐趋于平稳,两组间没有统计学差异(P>0.05)。3.干预前,与正常对照组相比,模型对照组组大鼠FBG均显著升高(P<0.01)。干预2、4、6、8周后,与益糖康组和二甲双胍组大鼠FBG均显著降低(P<0.01)。干预第6周和第8周后,益糖康组大鼠FBG高于二甲双胍组,差异有统计学意义(P<0.05)。4.与正常对照组相比,模型对照组大鼠Hb A1c、FINS水平显著增加(P<0.01);与模型对照组相比,益糖康组、二甲双胍组大鼠Hb A1c、FINS均显著下降(P<0.01),两组间没有统计学差异(P>0.05)。5.与正常对照组相比,模型对照组大鼠TC、TG、LDL-C显著增加,HDL-C显著下降(P<0.01);与模型对照组相比,益糖康组、二甲双胍组大鼠TC、TG、LDL-C显著下降,HDL-C明显增加(P<0.01)。与益糖康组相比,二甲双胍组大鼠TC较高(P<0.01),两组间TG、LDL-C、HDL-C差异没有统计学意义(P>0.05)。6.高胰岛素-正葡萄糖实验示,与正常对照组相比,模型对照组大鼠稳态BG显著升高、GIR显著下降(P<0.01)。与模型对照组相比,两个给药组大鼠BG明显下降、GIR明显升高(P<0.01),但两组间差异无统计学意义(P>0.05)。7.HE染色显示,益糖康组和二甲双胍组大鼠肝细胞排列较为规整、细胞体积、类脂空泡等病理改变明显减轻,受损的肌纤维,细胞核紊乱、移位等均有不同程度的改善。论文二:1.与正常对照组比较,模型对照组大鼠血清PEDF含量显著增加,肝脏、脂肪组织中PEDF表达水平显著降低(P<0.01);与模型对照组比较,益糖康和二甲双胍组血清PEDF含量下降,肝脏和脂肪组织中PEDF表达水平显著升高(P<0.01),两治疗组间无明显差异(P>0.05)。2.Western-blot及免疫荧光结果显示,与正常对照组相比,各组大鼠肝脏中的PI3K、Akt、GSK-3β表达水平无显著性差异(P>0.05),p-PI3K、p-Akt、p-GSK-3β表达下降(P<0.01)。与模型对照组相比,益糖康组和二甲双胍组大鼠肝脏中的p-PI3K、p-Akt、p-GSK-3β表达水平显著增加(P<0.01),两治疗组间没有统计学差异(P>0.05)。3.Western-blot及免疫荧光结果显示,与正常对照组相比,各组大鼠肝脏、脂肪中的AMPK、ATGL表达水平无显著性差异(P>0.05),p-AMPK、p-ATGL表达下降(P<0.01)。与模型对照组相比,益糖康组和二甲双胍组大鼠肝脏、脂肪中的p-AMPK、p-ATGL表达水平显著增加(P<0.01),两治疗组间没有统计学差异(P>0.05)。论文三:1.与正常组相比,模型组Hep G2细胞和3T3-L1细胞的活力和葡萄糖消耗量明显下降(P<0.01)。与模型组相比,各组Hep G2细胞和3T3-L1细胞的细胞活力和葡萄糖消耗量均有不同程度的增加(P<0.01),但三干预组间无统计学差异(P>0.05)。2.Hep G2细胞:Western-blot及免疫荧光结果显示,与正常组相比,模型组PEDF水平显著降低(P<0.01)。与模型组相比,各干预组中PEDF水平均有不同程度的增加(P<0.01),其中PEDF组显著高于益糖康组和二甲双胍组(P<0.01),益糖康组和二甲双胍组间无统计学差异(P>0.05)。3T3-L1细胞:与正常组相比,模型组PEDF水平显著降低(P<0.01)。与模型组相比,各干预组中PEDF水平均有不同程度的增加(P<0.01),其中益糖康组和PEDF组高于二甲双胍组(P<0.05、P<0.01)、益糖康组和PEDF组无统计学差异(P>0.05)。3.Hep G2细胞:与正常组相比,模型组中PI3K、Akt、GSK-3β表达水平无明显区别(P>0.05),p-PI3K、p-Akt、p-GSK-3β水平显著降低(P<0.01)。与模型组相比,各干预组中p-PI3K、p-Akt、p-GSK-3β水平均有不同程度的增加(P<0.01),其中,益糖康组和PEDF组p-PI3K水平高于二甲双胍组(P<0.01);PEDF组p-Akt水平高于二甲双胍组(P<0.01),益糖康组与二甲双胍组和PEDF组相比无统计学差异(P>0.05);三组间p-GSK-3β水平差异无统计学意义(P>0.05)。3T3-L1细胞:与正常组相比,模型组PI3K、Akt、GSK-3β表达水平无明显区别(P>0.05),p-PI3K、p-Akt、p-GSK-3β水平显著降低(P<0.01)。与模型组相比,各干预组中p-PI3K、p-Akt、p-GSK-3β水平均有不同程度的增加(P<0.01),其中,益糖康组和PEDF组p-PI3K水平显著高于二甲双胍组(P<0.05、P<0.01);PEDF组p-Akt、p-GSK-3β水平明显高于二甲双胍组(P<0.05)、益糖康组和二甲双胍组及PEDF组间无统计学差异(P>0.05)。4.Hep G2细胞:与正常组相比,模型组中AMPK、ATGL表达水平无明显区别(P>0.05),p-AMPK、p-ATGL水平显著降低(P<0.01)。与模型组相比,各干预组p-AMPK、p-ATGL水平均有不同程度的增加(P<0.01),其中PEDF组p-AMPK水平明显高于益糖康组和二甲双胍组(P<0.01),益糖康组和二甲双胍组间无统计学差异(P>0.05);PEDF组p-ATGL水平高于二甲双胍组(P<0.05),益糖康组与二甲双胍组和PEDF组间无统计学差异(P>0.05)。3T3-L1细胞:与正常组相比,模型组中AMPK、ATGL表达水平无明显区别(P>0.05),p-AMPK、p-ATGL水平显著降低(P<0.01)。与模型组相比,各干预组p-AMPK、p-ATGL水平均有不同程度的增加(P<0.01),其中PEDF组p-AMPK水平明显高于益糖康组和二甲双胍组(P<0.01),益糖康组和二甲双胍组间无统计学意义(P>0.05);各干预组p-ATGL水平之间无统计学意义差异(P>0.05)。结论:1.益糖康能降低T2DM大鼠血糖水平、调节糖代谢、改善胰岛素抵抗;2.益糖康能调节T2DM大鼠血脂水平、改善脂代谢紊乱;3.益糖康可能通过上调肝脏和脂肪组织中的PEDF表达,激活PI3K/Akt和AMPK信号通路改善T2DM大鼠胰岛素抵抗。