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传染性法氏囊病(Infectious Bursal Disease, IBD)是由传染性法氏囊病病毒(Infectious Bursal Disease Virus, IBDV)引起的以侵害雏鸡淋巴组织,特别是中枢免疫器官—法氏囊为主要特征的传染病。该病不仅引起患病动物死亡,而且还导致机体免疫抑制,使机体的免疫防御能力降低和疫苗免疫接种失败,对易感鸡群实施疫苗接种是预防该病最有效的方法,但由于各地流行的IBDV毒株的毒力与抗原性的差异,给疫苗毒株的选择造成较大的困难,每年由于IBD免疫失败或免疫抑制造成的经济损失巨大。为了抵抗超强毒的攻击以及母源抗体的干扰,目前广泛应用中等毒力的IBD活疫苗,给IBD的防控带来极大的隐患,灭活疫苗存在着抗原制备的困难。鉴于此,进一步分析当前IBDV的分子流行病学、研制新型的基因工程疫苗,仍是当前禽病防控工作中亟待解决的重要课题。研究内容包括两个部分：试验1：IBDV抗原表位与HBcAg嵌合体基因的构建及其表达产物分析为了提高模拟IBDV多表位基因5epis的免疫效力,运用重叠延伸PCR技术,在乙型肝炎病毒核心抗原(Hepatitis B core antigen, HBcAg)基因的231位～232位核苷酸(77位～78位氨基酸残基)之间插入BamH I和EcoR I酶切位点,构建基于HBcAg修饰基因(Modified HBc, mHBc)的抗原表位嵌合体基因分子载体pET-mHBc。将模拟IBDV多表位基因5epis定向插入到pET-mHBc的mHBc基因中,获得嵌合体基因mHBc-5epis表达质粒pET-mHBc-5epis,在大肠杆菌中表达。用SDS-PAGE分析,重组嵌合体蛋白的分子量约为29ku；在Western-blotting试验中,重组嵌合体蛋白与IBDV抗体反应形成1条特异性蛋白带。将重组菌超声破碎后,用电镜观察,可见重组嵌合体蛋白呈病毒样颗粒(VLP),直径约100nm～120nm；用IBDV抗体夹心ELISA检测,抗原效价达到1：200。本试验成功构建了5epis与HBcAg嵌合体基因,在大肠杆菌中高效表达具有IBDV抗原反应性的重组病毒样颗粒嵌合体蛋白,为表位型IBD基因工程疫苗的研究提供了一条新途径。试验2：重组mHBc-5epis嵌合体蛋白的免疫功能分析将重组菌pET-mHBc-5epis诱导表达,用SDS-PAGE胶回收方法纯化重组mHBc-5epis嵌合体蛋白,免疫1月龄SPF鸡,双抗体夹心ELISA法检测免疫鸡血清中的IFN-y、 IL-2、IL-4、IL-6动态变化,在免疫后的第2天IL-2、IL-4表达量都有明显上升;用间接ELISA去检测免疫鸡血清中IBDV抗体,在免疫后的第14天IBDV抗体效价达到1：100。试验表明,嵌合体基因HBcAg分子载体能够增强鸡产生特异性的体液免疫及细胞免疫应答。本试验首次证明了HBcAg在鸡体内能增强抗原表位的免疫保护效力,为新型IBD颗粒化多表位疫苗的研究奠定了基础。