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第一部分:基质金属蛋白酶-9与组织金属蛋白酶抑制物-1在小鼠着床点子宫内膜的表达
目的:探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和组织金属蛋白酶抑制物-1(TIMP-1)在小鼠着床点子宫内膜组织中表达的特点。
方法:应用免疫组织化学染色技术和反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测MMP-9与TIMP-1蛋白和mRNA在小鼠着床点子宫内膜的表达,并与正常种植期的小鼠子宫内膜比较,分析MMP-9与TIMP-1在其中的表达和变化规律。
结果:MMP-9与TIMP-1蛋白在着床点内膜的表达要高于正常种植期的小鼠子宫内膜,其mRNA在前者的表达也要高于后者(P<0.01);MMP-9/TIMP-1的蛋白比值和mRNA的比值在着床点组均显著高于对照组(P<0.01)。
结论:MMP-9与TIMP-1在小鼠着床点内膜高度表达,两者共同参与小鼠胚胎种植过程的调节。
第二部分:基质金属蛋白酶-26与组织金属蛋白酶抑制物-4在小鼠着床点子宫内膜的表达
目的:探讨基质金属蛋白酶-26(MMP-26)和组织金属蛋白酶抑制物-4(TIMP-4)在小鼠着床点子宫内膜组织中表达的特点。
方法:分离小鼠着床点子宫内膜,应用免疫组织化学染色技术检测MMP-26与TIMP-4蛋白的表达,应用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测MMP-26与TIMP-4mRNA的表达,并与正常种植期的小鼠子宫内膜比较,分析MMP-26与TIMP-4在其中的表达和变化规律。
结果:MMP-26与TIMP-4蛋白在着床点内膜的表达要高于正常种植期的小鼠子宫内膜,其mRNA在前者的表达也要高于后者(P<0.05)。MMP-9/TIMP-1蛋白酶的比值在着床点组高于对照组(P<0.05),MMP-26/TIMP-4的mRNA表达水平比值在着床点组与对照组无差异(P>0.05)
结论:MMP-26与TIMP-4在小鼠着床点内膜高度表达,两者共同参与小鼠胚胎种植过程的调节。
第三部分基质金属蛋白酶9、-26与组织金属蛋白酶抑制物-1、-4在体外培养小鼠种植前胚胎中的表达
目的:探讨MMP-9、MMP-26、TIMP-1、TIMP-4在体外受精-胚胎培养的小鼠种植前胚胎中的表达规律。
方法:采集小鼠的成熟卵细胞和精子,体外受精并继续培养至囊胚。分别使用MMP-9、MMP-26、TIMP-1、TIMP-4四种抗体对4-10细胞的胚胎和囊胚进行免疫荧光染色,在激光扫描共聚焦显微镜下观察四种蛋白在胚胎中的表达。
结果:MMP-9、MMP-26、TIMP-1、TIMP-4在小鼠4-10细胞胚胎中均有表达。MMP-9与TIMP-1在小鼠囊胚的滋养细胞层和内细胞团中均有表达;MMP-26和TIMP-4在小鼠囊胚的滋养细胞层上有集中的明确表达,在内细胞团中几乎无表达。
结论:MMP-26与TIMP-4只参与囊胚向子宫内膜的种植,而不参与极早期胚胎胚层的分化等生理过程;MMP-9与TIMP-1则同时参与这两个过程。