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目的：胃癌(gastric carcinoma,GC)在全世界范围内都有着较高的发病率和致死率。我国的胃癌发病率已经跃居世界首位,占全世界胃癌发病率的42%。由于胃癌具有“发病率高、转移率高、病死率高”、“早期诊断率低、手术根治率低和5年生存率低”的“三高、三低”的特点,所以探索关键的胃癌标志物以实现胃癌的早期临床诊断,从而进一步发现胃癌治疗的潜在靶点用于胃癌的治疗,是胃癌研究领域近些年最大的热点也是设计本课题的临床意义所在。胃癌最大的特点是早期易发生组织和腹腔的转移,也是影响胃癌预后的主要因素,因此研究胃癌转移的机制,找到关键的靶基因是胃癌研究中迫切需要解决的问题。本课题主要研究的基因TIPE1 (tumor necrosis factor a-induced protein 8-like 1,TNFAIP8L1)是TNFAIP8 (tumor necrosis factor a-induced protein8,肿瘤坏死因子α-诱导蛋白8)家族中的一员,该家族目前为止发现了TIPE1、TIPE2、 TIPE3和TNFAIP8四个成员,这四个成员高度同源且其中TIPE1和TIPE2的同源性达到了86%。研究表明TNFAIP8家族与细胞凋亡、细胞间的信号转导以及肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移密切相关,其中TIPE2是在2008年发现的免疫负调控因子,也是目前该家族中研究最热的分子。已经有充分的证据表明TIPE2能够显著抑制由Ras介导的肿瘤发生和侵袭转移,基于TIPE1和TIPE2的高度同源性,我们推测TIPE1在肿瘤的发生发展中的也发挥了重要的作用。本课题拟通过临床胃癌标本、胃癌细胞系和裸鼠转移模型三个方面对TIPE1在胃癌侵袭和转移中发挥的作用及机制进行深入的探究,完善胃癌发生转移的机制,用于胃癌的临床诊断和治疗。方法：1.检测临床胃癌标本中TIPE1的表达变化1.1收集100例胃癌和癌旁组织,通过实时定量RT-PCR和免疫组化(IHC)的方法检测TIPE1在胃癌组织中的表达变化情况。1.2查阅100例临床胃癌患者的病理资料,统计分析TIPE1表达与临床资料如病理分期以及组织和淋巴转移情况间的相关性。2.探究TIPE1在胃癌发生发展中的作用及机制2.1本实验选用SGC7901、BGC823、AGS三种常见胃癌细胞系作为研究对象。构建稳定过表达TIPE1的慢病毒和基因沉默TIPE1的RNAi用于转染细胞。2.2体外实验：通过划痕、Transwell模拟胃癌侵袭转移模型,观察过表达TIPE1以后胃癌细胞侵袭和迁移能力的变化。2.3体内实验：选取5-6周龄的雄性裸鼠随机分为实验组和对照组,尾静脉注射稳定过表达TIPE1的胃癌细胞系SGC7901、BGC823建立体内转移模型。一个半月后取材,通过苦味酸染色、HE染色观察过表达TIPE1对胃癌细胞体内转移的影响。2.4通过实时定量RT-PCR、Western blot以及免疫荧光的方法检测过表达TIPE1或沉默TIPE1后EMT相关蛋白E-cadherin、Vimentin、Slug、Snail、Twist以及MMP2、MMP9和β-catenin的表达变化情况。结果：1.相比于癌旁组织TIPE1在胃癌组织中的表达显著降低mRNA(实时定量RT-PCR)和蛋白检测结果(IHC)显示,相对于正常癌旁组织,胃癌组织中的TIPE1表达量显著降低,并且这种降低趋势与胃癌的分化程度、局域淋巴结的转移情况密切相关,即随着胃癌分化程度的降低,TIPE1的表达也随之进一步降低,在发生远处转移时TIPE1的表达最低。2.过表达TIPE1能够显著抑制胃癌细胞的转移和侵袭2.1用稳定过表达TIPE1的细胞系SGC7901和BGC823进行划痕实验,观察Oh,6h,12h和24h迁移距离,统计结果显示从6h开始过表达TIPE1组的迁移距离就显著小于对照组。体外Transwell和侵袭实验结果与划痕实验结果一致,表明过表达TIPE1体外能够显著抑制胃癌细胞系SGC7901和BGC823的迁移和侵袭。2.2裸鼠转移模型取材进行苦味酸和HE染色发现尾静脉注射的胃癌细胞系主要转移至肺,且过表达TIPE1组肺部转移结节数明显少于对照组。3.过表达TIPE1能够显著抑制EMT3.1实时定量RT-PCR发现过表达TIPE1后能够显著抑制EMT相关基因Vimentin、Slug、Snail和Twist的表达,同时使EMT最重要的标志物E-cadherin表达升高。沉默TIPE1后结果与之相反,从正反两方面表明TIPE1明显抑制EMT相关的标记物及转录因子的表达,提示在EMT中发挥重要作用。3.2 Western blot和免疫荧光实验结果进一步验证了TIPE1抑制EMT的结果。同时发现过表达TIPE1能够抑制基质金属蛋白酶MMP2和MMP9的表达,并且显著抑制β-catenin的表达。结论：1.TIPE1在胃癌组织中的表达与正常癌旁组织相比显著降低,并且伴随胃癌分化程度的降低,TIPE1的表达量也随之进一步降低。2.体内和体外实验充分表明TIPE1能够显著抑制胃癌细胞的侵袭和转移。3.TIPE1主要通过上皮间质转化途径抑制胃癌的侵袭转移。