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目的通过研究小鼠去透明带胚胎体外培养方法的选择对慢病毒感染法制备转基因小鼠效率的影响，探索最适于慢病毒与去透明带胚胎共培养的体外培养方式，初步建立慢病毒感染去透明带胚胎技术平台，为下一阶段通过慢病毒感染法制备转基因小鼠奠定基础。方法供卵母鼠发现阴道栓当天，无菌条件下，剪取输精管，0.1mlFHM操作液冲洗输精管，收集合子，透明质酸酶去除卵丘细胞，0.5%链酶蛋白酶去除透明带，将收集的去透明带合子按mWOW培养法、微滴单卵+群卵法、微滴单卵法、微滴群卵法随机分为四组，KSOM-AA培养液培养4天，每24h半量换液，以早期胚胎各阶段发育率、囊胚率和囊胚细胞数作为衡量指标，探讨四种体外培养方法对去透明带胚胎发育的影响。在此基础上，携带EGFP的慢病毒感染去透明带桑椹胚，48h后随机抽取感染囊胚，单细胞巢式PCR检测外源基因在胚胎内的整合情况。荧光显微镜下统计荧光胚胎个数，以此计算慢病毒感染效率。结果mWOW法、微滴单卵+群卵法、微滴单卵法三种方法之间囊胚发育率差异有统计学意义（p<0.05）。比较mWOW法、微滴单卵+群卵法、微滴单卵法、微滴群卵法4种方法的2-细胞发育率、mWOW法、微滴单卵+群卵法、微滴单卵法三种方法的4-细胞发育率差异无统计学意义（p>0.05）。微滴单卵+群卵法和微滴单卵法的8-细胞发育率差异无统计学意义（p>0.05）,均高于mWOW法的8-细胞发育率（p<0.05）。mWOW法、微滴单卵+群卵法的桑椹胚发育率差异无统计学意义（p>0.05）,均高于微滴单卵法的桑椹胚发育率（p<0.05）。微滴单卵+群卵法、微滴单卵法的囊胚回收率都是100%，均高于mWOW法的囊胚回收率（p<0.05）。mWOW法、微滴单卵+群卵法、微滴单卵法得到的囊胚的细胞数均低于体内囊胚的细胞数（p<0.05）。微滴单卵+群卵法和微滴单卵法得到的囊胚的细胞数差异无统计学意义（p>0.05），均低于mWOW法得到的囊胚的细胞数（p<0.05）。随机抽取的7个囊胚进行单细胞巢式PCR检测，7个样品经外引物与内引物两次扩增，均为PCR阳性。慢病毒感染mWOW培养的无透明带桑椹胚48h，囊胚率90.1%（72/80），慢病毒感染率78.8%（63/80）。结论1、mWOW培养法与微滴单卵法、微滴群卵法及微滴单卵+群卵法比较，mWOW培养法更适于作为慢病毒与桑椹胚共培养方法。2、通过mWOW法共培养慢病毒与去透明桑椹胚成功将EGFP外源基因导入小鼠胚胎。