干扰EGFR对胃癌AGS细胞肿瘤生物学行为及化疗敏感性的影响

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目的检测表皮生长因子受体(EGFR)干扰对胃癌AGS细胞系肿瘤生物学行为如增殖、迁移、侵袭、凋亡、细胞周期的影响,检测EGFR干扰对该细胞系化疗敏感性的影响,并初步探究其机制。方法设计表皮生长因子受体siRNA,转染胃癌AGS细胞,应用荧光计数计算转染率,提取总RNA和蛋白,分别用RT-PCR检测EGFR mRNA表达量,蛋白印迹法检测细胞中表皮生长因子受体蛋白表达抑制情况。应用cck-8法分析EGFR干扰对胃癌细胞增殖的影响及对多种胃癌化疗药物化疗敏感性的影响。构建transwell模型,观察EGFR干扰对胃癌细胞迁移、侵袭的影响。应用流式细胞仪检测EGFR干扰对胃癌细胞细胞周期和凋亡的影响。在蛋白水平检测EGFR传导通路多个蛋白表达变化情况。结果1.所设计合成的3条EGFRsiRNA转染胃癌AGS细胞系转染效率为87%,RT-PCR证实所用siRNA能减少EGFRmRNA的表达,蛋白电泳显示干扰组EGFR蛋白表达抑制作用明显,相对表达量显著下降。2.EGFRsiRNA组细胞增殖明显被抑制,与对照组和阴性siRNA组相比有统计学意义(P<0.05),在48小时的抑制率高于24小时的抑制率。EGFRsiRNA组细胞对顺铂、阿霉素、紫杉醇的化疗敏感性提高。3.与对照组和阴性siRNA组相比,EGFRsiRNA组细胞迁移能力和侵袭能力减弱。4.与对照组和阴性siRNA组相比,EGFRsiRNA组细胞早期凋亡和坏死的细胞比例增加,流式细胞仪检测细胞周期结果细胞G0/G1期细胞比例明显增加。5.蛋白电泳结果,试验组AKT和p-AKT表达有所下降,而Erk和p-Erk无明显差别。结论1.EGFR被干扰时肿瘤细胞增殖受到抑制,抑制效果有时间依赖性。在胃癌AGS细胞系干扰EGFR表达能提高胃癌细胞对顺铂、阿霉素、紫杉醇的化疗敏感性,降低胃癌细胞迁移和侵袭能力,EGFR表达被抑制时胃癌细胞的凋亡坏死增加,抑制G1期→S期的过程。2.抑制EGFR对细胞产生的效应可能是通过PI3K-AKT通路实现的
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