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目的:1、探讨ADM能否诱导胰腺癌BXPC-3细胞发生上皮间质转化?2、探讨二甲双胍在治疗剂量ADM诱导胰腺癌BXPC-3细胞发生上皮间质转化过程中的作用。方法:采用ADM体外刺激的方法培养胰腺癌BXPC-3细胞,构建EMT模型,于倒置显微镜下观察细胞形态学变化;根据实验目的将BXPC-3细胞进行分组,可分为BXPC-3-ctr组;BXPC-3-ADM组;BXPC-3-ADM+M组;BXPC-3+M组;MTT法检测ADM及二甲双胍对细胞增殖的影响;细胞划痕修复试验观察ADM及二甲双胍对细胞迁移的影响;流式细胞仪检测ADM及二甲双胍对细胞凋亡的影响;RT-PCR及Western blot检测EMT相关的重要标志分子P-stat3,Twist,E-cadherin及Vimentin在m RNA和蛋白表达水平上的变化。结果:1.倒置显微镜下观察无任何药物刺激的BXPC-3细胞组及采用25ng/L ADM干预的BXPC-3细胞组在不同时期的形态学差异,发现ADM能诱导胰腺癌BXPC-3细胞向间质细胞样细胞形态转化,使原本典型的连接紧密的上皮样细胞变得松散且形态极不规则,表现为类似成纤维状,较之普通BXPC-3细胞有典型的形态学变化。2.MTT法检测ADM及二甲双胍对细胞增殖的影响,ADM促进人胰腺癌Bxpc-3细胞增殖;二甲双胍抑制人胰腺癌Bxpc-3细胞增殖,且二甲双胍可抑制ADM对人胰腺癌Bxpc-3细胞的增殖促进作用(P<0.01)。3.细胞划痕修复实验比较各实验组细胞迁移能力,Bxpc-3-ADM培养组与Bxpc-3-ctr组相比,在划痕后24h及48h,细胞缺口均变小,而在划痕后48h,划痕的缺口缩小的更为明显,而对照组划痕的缺口仍较宽;Bxpc-3-ADM+M培养组与Bxpc-3-ADM培养组相比,在划痕后24h及48h,Bxpc-3-ADM+M培养组划痕的缺口均比Bxpc-3-ADM培养组划痕的缺口大。Bxpc-3+M培养组与对照组相比,在划痕后24h及48h,Bxpc-3+M培养组划痕的缺口均比对照组大。4.流式细胞仪检测ADM及二甲双胍对细胞凋亡的影响,ADM对人胰腺癌Bxpc-3细胞具有抑制凋亡作用;二甲双胍对人胰腺癌Bxpc-3细胞具有促进凋亡的作用,且二甲双胍可抑制ADM对细胞凋亡的抑制作用(P<0.01)。5.RT-PCR检测各实验组细胞EMT相关标志分子Twist,E-cadherin及Vimentin m RNA的表达水平,结果显示,与对照组相比,ADM干预后的BXPC-3细胞E-cadherin m RNA表达水平显著降低,而与之对应的Twist及Vimentin m RNA表达明显增高(P<0.01);与Bxpc-3-ADM组相比,Bxpc-3-ADM+M组及Bxpc-3+M组BXPC-3细胞E-cadherin m RNA表达出现增高趋势,而Twist及Vimentin m RNA表达则出现降低现象(P<0.05)。6.Western blot检测各实验组细胞EMT相关标志分子P-stat3,Twist,E-cadherin及Vimentin蛋白表达水平,结果表明,ADM处理后细胞E-cadherin蛋白表达水平较对照组明显降低,而P-stat、Vimentin及Twist的表达水平均较对照组升高;二甲双胍干预48h后,BXPC-3-ADM+M组及BXPC-3+M组与BXPC-3-ADM组相比较,上皮细胞相关标志分子E-cadherin的表达均出现升高趋势,而间质细胞相关标志分子P-stat、Twist、Vimentin的蛋白表达水平均显著降低。(P<0.01)。结论:1.ADM能诱导胰腺癌细胞BXPC-3发生EMT,使细胞的增殖和迁移能力增强,EMT相关标志分子的表达水平也发生相应变化。2.二甲双胍能明显抑制阿霉素诱导胰腺癌BXPC-3细胞的增殖和迁移能力,同时抑制胰腺癌细胞的EMT进程。