根癌农杆菌介导的抗寒基因转录因子CBF转化苹果的研究

被引量 : 20次 | 上传用户:ab7268062
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
本研究以苹果(Malus domestica Borkh)营养系砧木M26和栽培品种嘎拉试管苗为试验材料,以农杆菌EHA105为媒介把目的基因——抗寒基因的转录因子CBF导入苹果。通过对影响叶片、白化茎段离体再生不定芽和根癌农杆菌(Agrobacterium)EHA105介导的遗传转化效率的若干因素的研究,优化了苹果再生不定芽系统和遗传转化系统,并成功将CBF基因导入到了苹果的基因组中。 主要研究结果如下: 1.苹果不同外植体再生不定芽能力不同,以白化茎段的再生效果优于叶片。适宜苹果白化茎段不定芽再生的体系为:继代苗暗培养20天左右获得白化茎段,取1~2节位的白化茎段切成0.5cm的小段,接种(平放)在MS培养基上,暗培养2~3周就会有芽点出现。M26和Gala的不定芽再生效率均达到95%以上。 2.培养基中添加适宜浓度的BA(5.0mg/L)和TDZ(1.0mg/L) 可使M26白化茎段不定芽再生达到较高的水平,但TDZ的使用会增加再生芽的玻璃化现象,以5.0mg/L的BA用于M26白化茎段不定芽再生较为适宜。 3.白化茎段的褐化现象比叶片严重,在再生培养基中添加100mg/L Vc可以抑制褐化现象的发生,1mg/L的AgNO3提高苹果不定芽的再生效率;当Vc浓度超过400mg/L或AgNO3浓度超过3mg/L时,将抑制苹果白化茎段不定芽的再生,且白化茎段伤口处褐化现象加重。 4.继代苗苗龄对白化茎段不定芽的再生有很大影响:取自继代培养20~25天的白化茎段上取材的1~2节位的茎段,再生频率最高。低于此苗龄白化茎因抽生太短不利于取材,而高于此苗龄,茎段分化率明显降低,并且褐化现象加重。 5.在根癌农杆菌EHA105介导的遗传转化中,当以白化茎段和叶片为转化材料时,有效的Km选择压分别为12mg/L和10mg/L;适宜的头孢霉素浓度为200mg/L。 6.乙酰丁香酮(AS)可以诱导vir区基因的表达,促进T-DNA的转移,在侵染液和共培养培养基中添加301μmol/L的AS可以提高苹果的基因转化效率。 7.通过对影响农杆菌介导转化的各种因素进行筛选,得到了一条最佳的转化途径:外植体在分化培养基上预培养1天;农杆菌活化至对数生长期,菌液浓度为OD600=0.6左右;侵染外植体10min;共培养2天;然后脱菌、选择同时进行。 8.共有12个转化株系通过了卡那霉素抗性检测,具体包括三个方面:①转化株在附加卡那霉素50mg/L的继代培养基上能够连续增殖继代,②转化株叶片在附加卡那霉素30mg/L的分化培养基上的再生能力同在无卡那霉素的培养基上的再生能力无明显差异,⑧转化株在附加卡那霉素30mg/L的生根培养基中能正常生根。
其他文献
<正> 从唯物辩证自然观来看:天地与人体相应,宇宙是宏观,人体脉搏是微观。古人曰:“惟天下之静者,乃能见微而知著。月晕而风,础润而雨。”说明了对待客观现象细心观察,就能够
PKPM系列软件的图形支撑系统CAD工程部(中国建筑科学研究院建筑结构研究所)1发展概况PKPM系列软件的图形支撑系统名为CFG(3D)。它的原意是“中文FORTRAN图形系统”,是1990年1月诞生的,专门为FOR-TRAN语言编程提供图形环境
在南澳大桥建成通车之前对南澳岛居民和旅游者进行问卷调查,结果表明:目前南澳岛客源构成以潮汕和广东省内为主;海岛居民与旅游者对南澳大桥建设持支持态度;对南澳岛旅游环境
研究背景与研究目的: 乳腺癌是威胁女性健康的主要疾病之一,我国妇女乳腺癌发病率近年来呈明显升高趋势。乳腺癌病因复杂,研究乳腺增生病和乳腺癌发病机制是女性乳腺癌防治工
目前,随着国家经济发展,城市化进程不断加快,城市交通拥堵成为诸多城市的普遍现象。在此背景下,城市轨道交通建设应运而生,为解决城市交通问题提供有效动力,是城市向前发展的
我国农村传统养老保险制度已“寿终正寝”,从2002年开始,全国各地开展了新型农村社会养老保险制度的试点,为推行全国性新型农村社会养老保险进行了有益的探索和准备。在简要梳理
本文主要采用问卷调查的形式收集数据然后运用SPSS软件进行统计分析,并结合实地观察、重点访谈等方法,对广州动漫产业的发展现状作了深入的调查与分析,为广州市发展动漫产业
本文是运用系统和综合的方法来整合企业管理思想的一个尝试。作者建立了一个整合管理的分析模型,目的在于为管理者提供一套简便、通用的思考方法及管理工具。全文分成四章:
利用演化算符的抽象形式,借助于算符运算技巧,对一维自由粒子的演化问题进行了形式计算.得到了一维自由粒子波包位置概率分布的方差随时间演化的结果,证明了一维自由粒子波包
企业可持续发展不仅是企业家和社会利益相关者不懈追求的目标,也是管理学者近年来不断探索的重大课题。本文从企业与环境关系的角度研究企业的可持续发展。在本质上,企业的复