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乙型病毒肝炎是由乙肝病毒引起的,通过血液和体液传播的、以肝脏损害为主的传染病。全世界约有3.5亿的乙肝病毒携带者,其中九千万发展为继发性肝病,由于乙肝病毒感染及其继发病而死亡的患者每年超过100万人。我国是乙肝病毒感染的高发区,约1.2亿人感染乙肝病毒,3000万人患慢性肝炎,每年死于乙肝病毒导致的肝癌、肝硬化者约35万人。
目前乙肝病毒的检测方法中,较为广泛采用的是酶联免疫吸附实验(ELISA)法,将小鼠HBsAg特异性单克隆抗体包被到微孔板上,然后将样本加入微孔中,再与辣根过氧化物酶(HRP)标记的单克隆小鼠二抗结合后可直接检测不同的抗原决定簇,在样本中存在有HBsAg时,形成特异性免疫复合物,并被固相载体捕获。随后加入底物,在有HBsAg免疫复合物存在时,无色的底物经酶催化形成有颜色的终产物。终止酶反应后,用酶标仪测量吸光度值。
本文研究了最佳的抗乙型肝炎病毒表面抗原S蛋白的单克隆抗体(IgG mAbS1)的蛋白浓度和包被浓度,以及抗S蛋白另一表位单克隆抗体和辣根过氧化物酶结合物(IgG mAb S2-HRP)的稀释度。方法是将IgG mAb S1蛋白包被浓度分别为2.5、3、3.5、4μg/mL的微板,与不同稀释度(1∶30、1∶60、1∶120)的IgGmAbS2-HRP酶结合物交叉进行实验,当IgG mAb S1蛋白浓度为3.5μg/ml以及IgG mAbS2-HRP酶结合物的稀释度为1/30时,ELISA试剂盒的效果最优;另外将IgG mAbS2-HRP酶结合物分别存放在酶稳定剂Diapro StabilZyme、C18、C19中,在4℃和37℃的恒温条件下保存2周和4周,结果显示C18、C19稳定剂比Diapro StabilZyme酶稳定剂的保护作用更好,其中C19酶稳定剂显示了最佳的结果,为新HBsAg试剂盒酶结合物的保存提供了新的方法。通过上述条件的筛选,对乙型肝炎病毒表面抗原ELISA试剂盒部分关键点进行了优化,为后续工作的开展提供了基础。