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2006年在我国南方部分地区暴发流行高致病性猪猪繁殖与呼吸综合征,对养猪业造成严重经济损失,中国动物疫病预防控制中心等单位历时数年研制成功首个高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(JXA1-R株)。目前国内已有多家企业获农业部批准可以生产高致病性猪繁殖与呼吸综合征疫苗,但目前市场上生产的这些疫苗由于缺乏标准物质对照而难以对其质量进行评估。因此需要我们尽快研制出用于控制疫苗质量的国家参考品。在本研究中,通过对高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(JXA1-R株)国家参考品候选物的筛选,选定效价较高、均匀性好的一批分装冻干,再对其各个特性值进行测定,建立了一套高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(JXA1-R株)国家参考品的制备方法,并制备该参考品成品800支。同时,为了测得参考品更精确的效力值,根据猪繁殖与呼吸综合征病毒保守基因序列设计探针引物,优化反应条件,建立了检测高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗参考品病毒含量的荧光定量PCR方法。并应用其配合细胞接种的方法对参考品的效力进行定值。定值结果为将参考品疫苗液每头份稀释100倍后,病毒核酸含量均值Ct值为17.08,病毒拷贝数为4.61×107copy/μL,接种细胞后收毒,测病毒核酸含量,结果均值为Ct值13.39,病毒拷贝数为4.85×108copy/μL,接种后病毒拷贝数扩大了10倍。与传统测半数组织感染量方法进行相关性分析,相关系数r=0.82,证明两种方法有很好的相关性。最后组织单位采用半数组织感染剂量(TCID50)方法对效力值进行协作标定,统计分析处理原始数据,将各协作单位分析测定的不确定度引入高致病性猪繁殖与呼吸综合征(JXA1-R株)国家参考品的定值结果中,得到更科学的、具有置信范围的定值结果6.202±0.42(-IgTCID50/头份)。