DNA双链断裂修复对于基因组稳定性的维持有着至关重要的作用,而修复通路缺陷可能导致肿瘤的发生。所以对于DNA双链断裂修复通路的阐明极具意义。ATM-Tip60修复通路处于DNA损伤修复通路的上游,占据整个通路的关键位置。ATM激酶可以激活一系列下游损伤修复蛋白,包括p53、Chk2、 SMCl、NBS1等。而ATM的激活需要Tip60对其乙酰化,所以对于Tip60活性在DNA损伤修复通路中激活的研究具有非常重要的意义。据文献报道,Tip60第86位丝氨酸的磷酸化在自噬反应中,激活了Tip60的乙酰转移酶活性,从而调控细胞的自噬反应。另一项研究发现p400的SANT结构域与Tip60的HAT结构域相结合而抑制了Tip60的HAT活性。本课题旨在研究Tip60磷酸化修饰及p400对于Tip60活性及DNA双链断裂修复通路的调控作用。主要研究内容包括Tip60磷酸化修饰对于DNA双链断裂修复ATM-Tip60通路重要蛋白活性、细胞凋亡及Tip60与其它蛋白相互作用的影响,Tip60与p400及其片段F4的相互作用在DNA双链断裂前后的变化。通过免疫荧光染色、免疫印迹、免疫共沉淀、流式细胞分析等实验技术阐明在DNA损伤后,p400如何对Tip60乙酰转移酶活性及DNA双链断裂修复通路发挥负调控作用以及Tip60磷酸化修饰如何对Tip60乙酰转移酶活性及DNA双链断裂修复通路发挥正调控作用。我们发现,Tip60的两个磷酸化位点突变使细胞照射后的γ-H2AX成弥散状分布,影响了γ-H2AX焦点的形成。这表明,Tip60的磷酸化突变对于DNA双链断裂修复效率有负影响。免疫印迹实验没有检测到Tip60的此磷酸化修饰对于修复蛋白ATM、p53等活性的影响,且Tip60磷酸化水平在DNA双链断裂前后无明显变化。流式细胞分析技术显示Tip60的磷酸化位点双突变体使细胞凋亡率上升。免疫沉淀实验表明p400及其片段F4与Tip60相互作用在DNA双链断裂前后无明显变化。而免疫共沉淀实验证实Tip60磷酸化位点突变对于Tip60与p400F4片段的相互作用无明显影响。由此,我们初步判断Tip60S86及S90的磷酸化修饰对于DNA双链断裂修复的效率有一定的影响,而该影响的机制还有待于确定。而p400对于Tip60的调控,还需进一步研究证实。