目前兽医临床上可用的抗病毒化药较少,鸭病毒性肝炎(Duck virus hepatitis.DVH)作为鸭的一种急性传染性病毒病,由于临床上缺乏有效的治疗药物,一旦发病,即造成重大的经济损失。因此,研究和开发一种对DVH的有良好治疗效果药物,具有较大的临床和科研意义。中药黄酮成分具有良好的抗病毒、抗氧化和免疫增强作用。本论文通过一系列体内外试验,先筛选出体外具有良好抗A型鸭肝炎病毒(Duck hepatitis A virus,DHAV)的单味黄酮成分,将这些成分组成黄酮成分复方,再筛选出体外具有良好抗DHAV作用的黄酮成分复方,以进行体内试验。经一系列体内试验筛选出最佳的抗DVH的黄酮成分复方,通过测定此复方对染病雏鸭肝损伤、抗氧化损伤、多种细胞因子分泌的影响,以及外抗病毒及刺激淋巴细胞增殖试验来初步研究其作用机制。具体试验分为以下六个部分。试验Ⅰ:抗DHAV单味黄酮成分的体外筛选本试验旨在筛选出在体外具有良好抗DHAV作用的单味黄酮类成分。首先用MTT法测定6味黄酮类化合物和1味多酚类化合物在DEHs上的最大安全浓度;然后以先加药物再接种病毒(方式A)和先接种病毒再加药物(方式B)两种方式,测定7味成分体外抗DHAV在DEHs上增殖的效果,以A570值和最大病毒抑制率为评价指标,筛选出抗DHAV效果较好的单味黄酮类成分。试验结果显示,此7种成分均有抗DHAV在DEHs上增殖的作用,其中蜂胶黄酮(PF)的抗DHAV效果最佳,芹菜素(AG)和虎杖苷(PD)在两种加药方式中表现比较平衡,野菊花黄酮(CF)和水飞蓟素(SM)在加药方式A下作用效果较好。试验Ⅱ:抗DHAV黄酮成分复方的体外筛选本试验旨在筛选出在体外具有良好抗DHAV作用的黄酮成分复方。首先用MTT法测定12个黄酮成分复方在DEHs上的最大安全浓度;然后以先加药物再接种病毒(方式A)和先接种病毒再加药物(方式B)两种方式,测定此12个复方在体外抗DHAV在DEHs上增殖的效果,以A570值和最大病毒抑制率为评价指标,筛选出抗DHAV效果较好的复方。试验结果显示,复方AG-EF-PD、AG-PD-PF、AG-SM、BCEN、BL-NF-PD、BL-PD、NF-PD-PF、PD-PF和PF-PR-SM均有抗DHAV在DEHs上增殖的作用,复方AG-PD、AG-PF-PR和BL-EF无抗DHAV作用。试验Ⅲ:抗DVH黄酮成分复方的体内筛选本试验旨在筛选出在体内具有良好抗DVH作用的黄酮成分复方。采用肌肉注射DHAV制造DVH模型,以上章在体外具有良好抗DHAV效果的黄酮成分复方反复进行体内试验,以雏鸭存活率作为评价指标,筛选出抗DVH效果较好的复方。试验结果显示,复方AG-EF-PD、AG-SM、BL-NF-PD和PF-PR-SM组雏鸭存活率与VC组无显著性,认为此4个复方体内无抗DVH 作用。复方 AG-PD-PF、BCEN、BL-PD、NF-PD-PF 和 PD-PF 可以提高感染 DHAV雏鸭的存活率,在体内有抗DVH作用,其中以BCEN效果最佳。试验Ⅳ:优选方BCEN对DVH的治疗作用本试验旨在探究优选方BCEN对DVH的治疗作用。采用肌肉注射DHAV制造DVH模型,雏鸭饮服BCEN予以治疗,通过对比BC、VC和BCEN组雏鸭存活率、肝损伤指标(肝脏眼观病理变化和肝损伤生化评价指标)、炎症因子(IL-6和IL-8)、HGF动态变化以及血中DHAV基因相对表达量,来研究BCEN对DVH的治疗作用。结果显示,BCEN可以显著提高炎症因子的分泌水平对抗炎症,显著提高HGF水平,减轻染病雏鸭肝损伤程度,降低血中DHAV基因表达量,显著提高雏鸭存活率。试验V:优选方BCEN在DVH病程中的抗氧化损伤和免疫调节作用本试验旨在探究优选方BCEN在DVH病程中的抗氧化损伤和免疫调节作用。通过测定血浆中氧化损伤评价指标(MDA、iNOS、SOD、CAT、GSH-Px)和免疫功能评价指标(抗体、INF-γ和IL-2)的变化,来评价BCEN的抗氧化损伤和免疫调节作用;通过对肝损伤生化评价指标、氧化损伤评价指标及细胞因子等的相关性分析,来综合分析BCEN在DVH整个病程中起的作用。结果显示,BCEN能显著降低染病雏鸭血浆的MDA和iNOS水平,显著提高血浆SOD、CAT和GSH-Px活性,具有良好的抗氧化损伤作用。BCEN还能显著提高抗体分泌水平,促进机体免疫机能的调动。BCEN能通过抗氧化作用来保护肝脏,减轻肝损伤;能通过促进多种细胞因子的分泌来调动机体免疫系统,对病毒的入侵快速而有效地作出反应,保护染病雏鸭。试验Ⅵ:优选方BCEN体外抗DHAV增殖和刺激淋巴细胞增殖作用本试验旨在探究优选方BCEN在体外抗DHAV增殖和刺激淋巴细胞增殖的作用。通过RT-PCR法检测BCEN对DHAV吸附DEHs、以及对DHAV的复制和释放影响来观察BCEN在体外对DHAV增殖的影响。同时用MTT法测定BCEN单独和协同PHA、LPS刺激T、B淋巴细胞增殖作用。试验结果显示,BCEN可以显著地抑制DHAV释放出细胞。BCEN有单独和协同PHA、LPS刺激T、B淋巴细胞增殖作用,而且对B淋巴细胞作用稍强。