红霉素(erythromycin，Er)是由糖多孢红霉菌(Saccharopolyspora erythraea)合成的次生代谢产物,为一类广谱大环内酯类抗生素,在临床上具有广泛应用。2007年,糖多孢红霉菌基因组全序列测序完成,标志着红霉素的研究进入了后基因组时期。为加速糖多孢红霉菌基因功能研究,本研究建立了糖多孢红霉菌线性片段同源重组一步基因突变技术,并开展了应用研究。　　本实验以KR6基因为材料,以Thio抗性基因(tsr)作为筛选标记,在其上下游分别连接KR6基因突变序列的两侧同源片段,利用PEG介导原生质体转化将线性DNA同源片段转入糖多孢红霉菌,通过tsr基因两侧同源片段与染色体同时重组,一步实现KR6基因快速敲除;线性同源片段长度与糖多孢红霉菌染色体同源重组效率密切相关,同源片段长度在500bp左右时,线性片段与染色体有效重组率很低,而同源片段长度超过1000bp时,可获得有效的基因失活突变菌株;以此技术为依托,本研究快速构建了糖多孢红霉菌?bldD基因突变体,经验证,bldD基因发生了突变。　　本研究建立的线性片段快速突变技术,为大规模、高效率地研究糖多孢红霉菌基因功能奠定了基础。