主客体结构微球载体的设计、制备及其表面结构对免疫检测性能影响研究

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开发高通量、高灵敏度和高特异性的免疫检测方法是生物检测和临床诊断的迫切需求,基于主客体结构的微球(beads on beads,BOBs)因其具有独特的多元微纳结构与提高的可反应比表面积而成为一类非常有应用价值的新型载体材料。探究这类载体微球表面精细微观结构对固载其表面的生物分子活性影响的规律和作用机制对开发高性能生物载体非常重要。本研究首先设计并可控制备了具有精密表面结构的三类载体微球,一种是表面光滑的羧基光滑微球(MPC),另外两种为主客体结构,但表面功能基团分布状态不同的BOBs微球。其次,以上述三类微球为载体,采用酶联免疫检测方法(ELISA)探究固载在上述三类微球表面的抗体识别免疫复合物的能力,从而揭示BOBs载体微球的表面精细结构对固载其表面的蛋白的生物活性的影响规律与作用机制。基于此目的,本文首先分别利用羧基氧化硅纳米颗粒和氨基磁性聚苯乙烯微球(MPs)为客体子球与主体母球,通过EDC/NHS活化法制备得到了表面具有类树梅形貌、具有微纳精细结构且主体微球表面功能基团为氨基的BOBs微球(SCMPN),并在SCMPN基础上通过表面羧基修饰制备得到了主、客体微球表面功能基团均为羧基的BOBs微球(SCMPC)。然后,分别研究了三种微球的基本理化性能,并以抗h CG抗体为模式研究对象,将抗α-h CG抗体共价荷载在上述三类微球表面,采用ELISA检测与流式荧光免疫检测两种典型的分析系统,分别研究他们在PBS缓冲体系和血清体系中识别免疫复合物的能力。结果表明抗体分子结合于SCPMN表面时检测活性最高,其次是MPC,结合在SCPMC表面的抗体分子检测活性最低。另外研究发现,载体微球表面曲率以及BOBs微球中组装结构对抗体分子活性均会产生显著影响,抗体分子结合在高曲率的表面时识别免疫复合物能力更强,而BOBs微球中多元拓扑结构存在会使结合于主体母球表面的抗体识别免疫复合物的能力降低。上述研究结果为设计与制备新型高性能的生物载体提供了一定的理论指导。
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