人工授精技术是促进家兔养殖业集约化、规模化发展的重要繁殖技术之一,而高效的公兔精液体外保存技术是人工授精技术推广应用的重要技术前提。但目前我国家兔养殖业中的人工授精技术体系尚不完善,核心问题是缺乏高效的公兔精液体外常温保存技术。目前家兔繁殖仍主要采用传统的现采现用新鲜精液进行人工授精,极易受到时间、空间和种兔生理周期等因素限制,且不利于种质资源跨区域交流,相关问题制约了我国家兔养殖业集约化、规模化的进一步发展。其次,公兔精液单次排精量小,且精子质膜不饱和脂肪酸含量高,对热、冷应激敏感,在体外保存条件下极易受氧化应激损伤,导致精子活力下降、品质降低。因此,如何有效提高公兔精子在体外保存条件下的抗氧化能力,是延长精子体外保存时间,提高公兔精液保存质量亟需解决的问题。本研究首先通过优化筛选与配方设计,研制了适用于公兔精液体外常温保存的以Tris为缓冲液的双糖型基础稀释液,并在此基础之上联合添加GSH或OPC,使精子的抗氧化能力显著增强,精子活力和质膜完整率进一步提高,在保存48 h后,精子活力仍维持在0.5以上,人工授精后仍可获得70%的受胎率,与鲜精60%的受胎率相当。这一研究结果将为家兔常温保存精液的人工授精技术临床推广与应用奠定了研究基础。具体试验结果如下:一、公兔精液常温保存稀释液的优化与筛选本试验旨在通过优化筛选,研制一种适合公兔精液体外常温保存的长效稀释液,以进一步完善家兔人工授精技术体系,满足我国家兔养殖业集约化、规模化发展需求。本试验首先比较了 4种常用动物精液保存基础稀释液（即基础稀释液A、B、C和D）对公兔精液体外常温保存的影响,结果发现含葡萄糖和果糖的双糖型精液稀释液组（即基础稀释液B）在常温保存公兔精液24 h及48 h后,无论是精子活力还是质膜完整率均明显优于其它3组（P<0.05）,在精子畸形率方面差异不显著（P>0.05）;与柠檬酸钠组及HEPES缓冲液组相比,三羟甲基氨基甲烷（Tris）缓冲液组在48 h后,pH值无显著变化（P>0.05）,且精子活力和质膜完整率均显著高于其它2组（P<0.05）;在上述基础稀释液中,分别添加0.75 g/100 mL BSA、1.0 mM GSH 和 6 mg/100 mL OPC 均可显著提高体外保存 48 h后精子活力（P<0.05）,并使精子MDA含量显著下降（P<0.05）。本试验结果表明,在以Tris-柠檬酸为缓冲对的含葡萄糖和果糖的双糖型精液稀释液中,添加浓度为 0.75 g/100 mL BSA,再添加 1 mM GSH 或 6 mg/100 mL OPC,均能显著提高精子体外保存质量,降低精子质膜脂质过氧化损伤程度,有效延长公兔精子体外保存的时间。二、抗氧化剂对公兔体外常温保存精子抗氧化能力的影响及人工授精试验本试验进一步探究了抗氧化剂GSH和OPC联合使用对公兔精液常温保存质量及精子抗氧化能力的影响,并通过人工授精试验评价本研究所研制的公兔精液常温保存稀释液临床应用的效果。结果显示,联合使用GSH和OPC抗氧化剂组与市售稀释液组,在体外保存24 h后精子活力和质膜完整率均显著高于基础稀释液组（P<0.05）,而在保存至48 h及72 h后,抗氧化剂组无论是精子活力还是质膜完整率均显著高于其它2组（P<0.05）;与基础稀释液组和市售稀释液组相比,体外保存至48 h后,抗氧化剂组中精子MDA含量与ROS水平均显著降低（P<0.05）,CAT与GSH-Px活性明显升高（P<0.05）;人工授精试验结果发现,将公兔精液保存在本研究所研制的常温保存稀释液（B组）或联合添加GSH和OPC的稀释液（C组）中24 h后进行人工授精,均获得了 60%的受胎率,接近鲜精组（A组）70%的受胎率,且显著高于某市售稀释液组（D组）30%的受胎率,但在窝均产仔数方面4组并无明显差异（分别为10.1、10.4、9.8和9.0）,48 h后人工授精结果显示C组受胎率为70%,仍与鲜精组60%的受胎率相当。本研究结果表明在基础稀释液中再联合添加GSH和OPC后,可使精子的抗氧化能力显著增强,精子活力和质膜完整率进一步提高;用本研究所研制的常温抗氧化保存稀释液,将公兔精液体外常温保存48 h后进行人工授精,仍可获得接近于新鲜精液水平的受胎率。