Ⅰ型胶原-PRP支架促进肌腱干细胞功能性分化的研究

来源 :中国人民解放军医学院 | 被引量 : 2次 | 上传用户:llzx373
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目的:探讨I型胶原-PRP支架促进肌腱干细胞(TDSCs)功能性分化的作用。方法:①采用酶消化法从兔髌腱及跟腱组织中分离TDSCs,培养后观察其多向分化潜能并检测干细胞标记物,鉴定其干细胞特征。②取第2代TDSCs,在I型胶原-PRP支架表面培养3天后,实时荧光定量PCR检测Collagen type I、Tenascin C、 Oct-4、 Nanog基因的mRNA表达水平。免疫荧光染色检测Nucleostemin、Oct-4、Tenascin C细胞标记物的表达水平。③TDSCs与I型胶原-PRP支架混合后种植于裸鼠体内,2周后取材。HE染色进行组织形态学检查,免疫荧光检测Collagen type I、CD31蛋白的表达水平。结果:①分离培养的TDSCs具有成骨、成软骨、成脂的多向分化能力,干细胞相关标记物染色呈阳性。②实时荧光定量PCR显示,与对照组相比,I型胶原-PRP支架能提高TDSCs的Tenascin C基因表达水平(p<0.05),但Collagen typeI、Oct-4、Nanog基因的表达没有统计学差异。免疫荧光染色显示,与对照组相比,I型胶原-PRP支架能提高TDSCs的Tenascin C的蛋白表达水平。③HE染色结果显示,I型胶原-PRP支架附和TDSCs(实验组)植入体内2周后,能形成类似肌腱的组织,Matrigel与TDSCs混合(对照组)植入体内2周后没有形成类似肌腱的组织。免疫荧光染色检测显示,与对照组相比,实验组表达较多的Collagen type I以及CD31蛋白。结论:①分离培养的TDSCs具有多向分化能力,表达干细胞相关标记物。②I型胶原-PRP支架能够保持TDSCs的干细胞特性,并促进TDSCs分泌肌腱相关蛋白。③I型胶原-PRP支架附和TDSCs植入体内,能促进TDSCs形成类肌腱组织,表达肌腱相关蛋白,并促进新生血管的生成。
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