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第一部分:重组hTSHR基因过表达慢病毒载体转染失分化甲状腺癌细胞株后对细胞功能的影响 目的:将前期构建好的重组hTSHR基因过表达慢病毒载体转染失分化型滤泡状甲状腺癌细胞株(FTC-133亚型),观察转染后的FTC-133细胞碘摄取的功能变化以及甲状腺碘摄取相关分子在基因及蛋白水平上的表达变化,以明确hTSHR对失分化型甲状腺癌细胞株再分化的作用和意义。 方法:将含有目的基因hTSHR的慢病毒载体pGC-FU-hTSHR-GFP及空白慢病毒载体pGC-FU-GFP分别加入FTC-133细胞中,并分别设定为实验组及空白对照组;未加入慢病毒载体的FTC-133细胞设定为阴性对照组。通过荧光显微镜观察三组细胞的转染效率,在含有10mIU/ml浓度的人促甲状腺激素(human Thyroid Stimulating Hormone,hTSH)培养液中培养24小时后用实时荧光定量聚合酶链反应(Realtime-PCR)方法检测钠碘转运体(Na+/I- symporter,NIS)、促甲状腺激素受体(Thyroid stimulation hormone Receptor,TSHR)、甲状腺过氧化物酶(Thyroid peroxidase,TPO)和甲状腺球蛋白(thyroglobulin,TG)mRNA的表达量,应用蛋白质印迹法(Western Blot)分别检测NIS、TSHR、TPO蛋白的含量,应用放射免疫测定法(Radioimmunoassay,RIA)测定TG蛋白的含量。结果:通过荧光显微镜的观察,实验组及空白对照组细胞的转染效率均达到80%,这表明重组hTSHR基因过表达慢病毒载体转染FTC-133细胞成功。在10mIU/ml hTSH刺激24小时后,实验组细胞较空白对照组及阴性对照组相比,125I的摄取率提高了3.3倍(P<0.01),甲状腺碘摄取相关基因NIS,TSHR,TPO和TG mRNA的表达均明显升高(P<0.01),NIS,TSHR,TPO和TG的蛋白表达水平也均相应升高(P<0.01)。 结论:重组hTSHR基因过表达慢病毒载体转染失分化甲状腺癌细胞后,可有效提高碘的摄取率及甲状腺碘摄取相关分子的表达,这为失分化甲状腺癌放射性碘治疗提供了一个新的思路。 第二部分:不同剂量131I清除分化型甲状腺癌残余甲状腺组织的疗效的META分析 目的:应用循证医学的研究方法评估不同剂量的131I清除分化型甲状腺癌残余甲状腺组织(清甲)的一次清甲成功率,病人生存质量、住院隔离时间及不良反应的发生率。 方法:检索MEDLINE,EMBASE,Cochrane Library、中国期刊全文数据库等并结合检索论文中引用的参考文献查询相关计算机及纸质文献,纳入所有与131I清甲相关的随机对照研究(Randomized Clinical Trials,RCTs)(截止日期为2012年11月)。两名研究人员独立分析提取,根据入选标准及排除标准筛选出最终资料。利用Review Manager5.1软件进行meta分析,主要评价指标为不同剂量131I的一次清甲成功率、病人生存质量、住院隔离时间及不良反应的发生率。 结果:共纳入9篇文献,计2569位病人。1100MBq(30mCi)131I与3700MBq(100mCi)131I相比,一次清甲成功率无统计学差异[RR0.91,(0.79-1.04),P=0.15];1100MBq131I与1850MBq131I(50mCi)及1850MBq与3700MBq相比,一次清甲成功率均无统计学差异[RR0.95,(0.83-1.10),P=0.52][RR1.00,(0.85-1.17),P=0.98]。1100MBq131I与3700MBq131I相比,病人在清甲当日及清甲后三个月的生存质量均无统计学差异[RR0.15,(-0.65-0.96),P=0.71][RR-1.1,(-2.37-0.17),P=0.09]。1100MBq与3700MBq131I相比,有较短的住院隔离时间及不良反应的发生率[RR0.65,(0.55-0.77),P<0.1][RR0.4,(0.32-0.50),P<0.05]。 结论:低剂量(1100MBq)131I与高剂量131I相比,一次清甲成功率及生存质量无统计学差异,却有着较短的住院隔离时间及不良反应的发生率等优势。因此,对于中低危分化型甲状腺癌病人术后首次行清甲治疗时,建议使用低剂量131I。