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骨形成蛋白-2(bone morphogenic protein-2,BMP-2)属于转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)超家族,是一种具有高度骨诱导活性的低分子多肽,它主要分布在一些具有成骨倾向的细胞中,并参与骨组织、牙齿组织的形成。碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblastgrowth factor,bFGF)属于成纤维细胞生长因子家族,是一种多功能、作用广泛的细胞因子,能广泛促进来源于中胚层及神经外胚层细胞的增殖,是体内重要的创伤愈合因子之一,对骨诱导有重要调节作用。它们都参与牙齿的发育,对牙周组织的再生具有重要作用,体内、外实验研究均发现二者联合应用有一定的协同作用,但是从牙齿发育角度对BMP-2和bFGF表达的系统研究却较少。本研究采用生后BALB/c小鼠牙齿发育实验模型,利用免疫组化技术对BMP-2及bFGF在出生后小鼠牙体牙周组织中的表达进行定位,为研究牙齿发育和及将BMP-2、bFGF应用于牙周组织的再生提供相应的理论依据。目的(1)建立出生后BALB/c小鼠牙齿发育动物模型。(2)探讨BMP-2及bFGF在出生后小鼠牙体牙周组织发育过程中的时空表达及意义。方法隔天取出生后第1～27天的BALB/c小鼠,拉颈处死,分离并解剖含下颌第一磨牙区下颌骨,新鲜配制4%多聚甲醛固定过夜。自出生后第7天的标本开始用甲酸-甲酸钠复合脱钙液脱钙,脱钙时间1～28天不等。常规石蜡切片,苏木素-伊红染色,确定小鼠牙齿发育情况。另外用免疫组化法检测牙发育过程中BMP-2和bFGF的表达。结果(1)出生后小鼠牙发育:出生后第一天小鼠下颌第一磨牙牙胚处于钟状晚期;第5天时内釉上皮和外釉上皮形成的上皮根鞘内折,牙根开始发育;第9天时根部的牙囊组织开始分化形成牙周组织;第17天时牙根发育约一半,牙周膜成纤维细胞排列具有方向性;第27天时牙周组织排列方向性明显,根尖区有大量的细胞性牙骨质,根尖孔缩窄,牙根的发育逐渐完成。(2)BMP-2在出生后小鼠牙体牙周组织发育中的表达:牙齿发育早期,BMP-2的表达比较广泛,它不仅在新生的牙槽骨边缘、成骨细胞胞浆、骨细胞陷窝中表达,也在前期牙本质、牙囊细胞、牙髓细胞中表达,并且在前期牙本质中表达较强,但是在成釉细胞和成牙本质细胞中BMP-2的表达不明显。随着牙囊细胞的分化,BMP-2开始在分化形成的牙周膜细胞中阳性表达,并且此时BMP-2在牙槽骨、牙髓细胞和牙周膜细胞中的表达最强。随着牙齿的进一步发育,BMP-2在牙槽骨、前期牙本质、牙髓中的表达逐渐减弱直至消失,但在牙周膜中的表达一直比较明显。整个发育过程中,BMP-2在牙本质、无细胞性牙骨质及牙齿发育后期形成的细胞性牙骨质中都不表达。(3)bFGF在出生后小鼠牙体牙周组织发育中的表达:bFGF的表达情况与BMP-2类似,但是在牙周膜和前期牙本质中,bFGF的表达要弱于BMP-2:而在牙髓细胞中,bFGF的表达要强于BMP-2。结论(1)BALB/c小鼠下颌第一磨牙在出生后第5天牙周组织开始发育,27天基本发育完成。(2)BMP-2在牙体牙周组织发育过程中的表达具有时空特异性。BMP-2广泛参与牙齿的发育,牙齿硬组织的形成、矿化,但是BMP-2在牙齿发育后期的表达弱于早期,这表明BMP-2除在牙齿发育早期具有重要作用外,亦在牙齿发育后期对牙体牙周组织的发育,维持牙周组织的功能起必不可少的阶段特异性作用,但是其在牙齿发育早期,对细胞的分化和硬组织矿化的启动的作用可能更为重要。(3)bFGF在牙体牙周组织发育过程中的表达具有时空特异性。bFGF也广泛地参与了牙齿的发育,可能对BMP-2具有一定的协同作用,但它对牙周膜、前期牙本质等的作用要弱于BMP-2,而对牙髓的作用更为明显。