柳蚕卵黄原蛋白受体基因的克隆与表达分析

来源 :安徽农业大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:yinjushicui
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柳蚕(Actias selene Hubner)是一种尚未开发的野生绢丝昆虫,属鳞翅目,大蚕蛾科,主要分布于中国、日本、印度等东亚和东南亚。国内外对柳蚕的研究报道较少,且大部分都是关于形态学和生物习性方面的报道和记载。在昆虫卵发生过程中,卵黄原蛋白由脂肪体合成并分泌到体液中,被发育的卵母细胞大量摄取,作为卵发生的营养需要而被利用。卵母细胞对卵黄原蛋白的摄取过程通过其受体(vitellogenin receptor/yolk protein receptor, VgR/YPR)介导的胞吞作用而实现。卵黄原蛋受体属于低密度脂蛋白受体,具有典型的LDLR保守功能结构域。主要包括如下5个组成部分:配体结合域(Ligand-binding domain)、表皮生长因子前体同源域(Epidermal growth factor precursor homology domain)、跨膜域(Transmembrane domain)、O-连糖功能域(O-linked carbohydrate domain)及胞质尾域(Cytoplasmic domain)。本文根据已解析的家蚕及其他昆虫的卵黄原蛋白受体cDNA序列,设计特异性引物,从柳蚕cDNA中扩增出了卵黄原蛋白受体基因,经克隆、测序和分析后获得了柳蚕卵黄原蛋白受体的基因序列(GenBank登录号:JQ809472),基因全长5848bp,包含138bp的5’端调控区序列,271bp3’端调控区序列,ORF序列全长5439bp,信号肽位于5’端由17个氨基酸组成。序列编码1813个氨基酸,预测蛋白分子量为203.9kD。序列比对表明,柳蚕的VgR与家蚕VgR蛋白相似性最高。利用ScanProsite在线软件分析柳蚕卵黄原蛋白受体蛋白功能域,采用PCR法扩增了柳蚕卵黄原蛋白受体的两个结合域LBD1和LBD2,并分别连接至pET-28a(+)表达载体,转入大肠杆菌BL21(DE3)菌株中,用IPTG进行了不同浓度的诱导表达。经SDS-PAGE电泳和Western blotting表明,被诱导的目的蛋白均得到了稳定的表达,进一步利用亲和柱层析纯化该重组蛋白,这为以后研究昆虫卵黄原蛋白受体的功能提供了参考。
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