禽腺病毒引起的包涵体肝炎和心包积水综合征给我国的禽类养殖业造成了巨大损失。病毒感染前期,禽无明显临床症状,无法进行早期治疗,因此疫苗接种成为首选的免疫防治策略。本文旨在研制一种高效、安全的亚单位疫苗,以应对禽腺病毒引起的感染。根据禽腺病毒的病原学研究,将抗原蛋白锁定为衣壳五邻体蛋白上的Fiber-2蛋白。为了使抗原发挥更强的免疫效力,挑选了细胞因子IL-2和IFN-γ做为疫苗佐剂,联合免疫后评价疫苗效力。首先,在昆虫细胞-杆状病毒系统中进行了Fiber-2的表达。将密码子优化后的Fiber-2序列插入至杆状病毒载体Bacmid上,将重组质粒转入Sf9细胞中,制备高滴度的病毒用于重组蛋白表达。使用双向琼脂扩散法对重组蛋白进行免疫原性检测,结果显示重组蛋白效价达到了 1:128,表现出良好的免疫原性。其次,在大肠杆菌系统中对细胞因子IL-2和IFN-γ进行表达。将密码子优化过的序列插入至pET28a(+)表达载体中,各种温度下的表达测试均显示目的蛋白以包涵体的形式存在于细胞裂解沉淀中,之后对两种蛋白包涵体复性。复性结果显示,重组chIL-2和chIFN-γ蛋白以可溶形式存在于缓冲液中。最后,我们将重组Fiber-2抗原和重组chIL-2、chIFN-γ分子佐剂制备疫苗免疫鸡群进行动物实验。单独Fiber-2的免疫保护结果表明,50 μg呢的剂量可为鸡群提供100%的保护效果。低剂量(10μg)Fiber-2蛋白与分子佐剂的联合免疫结果表明,chIFN-γ的佐剂效果优于chIL-2,两者同时与低剂量Fiber-2蛋白联合免疫对鸡群的保护率同样可达100%。