论文部分内容阅读
藻胆体是一种存在于蓝绿藻和红藻中的一种高度有序的捕光复合物,主要存在于类囊体膜的质体表面,由藻胆蛋白和连接多肽组成,藻胆蛋白由藻胆色素和相应的脱辅基蛋白构成。
通过氨基酸序列的同源性对比,在聚球藻WH 8102中搜索出与裂合异构酶RpcG同源性较高的蛋白序列,克隆其基因cpeY(synw2013),cpeZ(synw2012)到相应的表达载体上,成功构建了pET-cpeY和pCDFDuet-cpeZ,为寻找催化藻红蛋白α亚基MpeA的75位共价连接藻尿胆素PUB的裂合异构酶准备了必要的材料。
通过大肠杆菌的体内重组,将质粒pCOLADuet-cpcB,pETDuet-cpcS,pACYCDuet-ho1-pcyA共转化到大肠杆菌BL21(DE3)中并低温诱导表达,经过光谱分析确认了CpcS是一种具有催化CpcB共价偶联藻胆色素PCB的裂合酶。
集胞藻(Synechocystis sp.PCC 6803)在缺氮条件下会发生明显的颜色变化,即由蓝绿色变成黄绿色的漂白现象,此时藻细胞能够降解藻胆体为其生命体提供氮源。以此设计实验,通过荧光定量PCR技术检测基因的差异性表达来分析与藻胆体降解相关的基因,ClpP可能参与藻胆体降解的初级阶段或者是参与藻胆体降解相关的信号调控;数据分析表明,hhoB基因在藻胆体迅速降解的时间内其相对表达量是成倍增加的,因此可以认为HhoB可能是一种直接参与藻胆体降解的水解酶。