【摘 要】
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目的:肝细胞癌（HCC）是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一,以预后差,易发生早期转移为著。从全球范围来看,慢性乙型肝炎病毒（HBV）以及丙型肝炎病毒（HCV）感染占全世界肝癌患者的75%-80%,其中,撒哈拉以南非洲和东亚是肝细胞癌的重灾区,中国肝癌患者数量就达世界患者总数的50%以上,这与其巨大的HBV感染人群是分不开的。早期浸润、转移和复发等生物学行为,使得肝癌的临床治疗成为当今难以攻克的课题,
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目的:肝细胞癌（HCC）是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一,以预后差,易发生早期转移为著。从全球范围来看,慢性乙型肝炎病毒（HBV）以及丙型肝炎病毒（HCV）感染占全世界肝癌患者的75%-80%,其中,撒哈拉以南非洲和东亚是肝细胞癌的重灾区,中国肝癌患者数量就达世界患者总数的50%以上,这与其巨大的HBV感染人群是分不开的。早期浸润、转移和复发等生物学行为,使得肝癌的临床治疗成为当今难以攻克的课题,其中上皮-间质转化（EMT）被认为是肿瘤侵袭转移的关键步骤,肿瘤细胞通过EMT过程获取了强大的侵袭和转移能力,可以脱离原发灶向其他组织和器官运动,而同时,HBV的X基因所表达的X蛋白（HBx）在促进肝细胞癌的上皮-间质转化过程,参与肿瘤的侵袭和转移,推动肿瘤的进展中,发挥重要作用。为了研究HBx促进肝细胞癌上皮-间质转化的机制,本课题拟明确HBx是否可以通过circRNA/miRNA/mRNA的内源竞争RNA机制（ceRNA）促进肝细胞癌的上皮-间质转化过程,并找出其中发挥关键作用的circRNA,研究其促进肿瘤侵袭转移的具体机制。研究方法:首先选择HepG2细胞系作为主要研究细胞,并使用慢病毒转染的方法对其构建HBx过表达的稳转细胞系,通过观察细胞表型变化以及检测E-钙黏蛋白,N-钙黏蛋白和波形蛋白等EMT相关蛋白指标来验证HBx过表达细胞是否存在上皮-间质转化过程的发生,并通过Transwell侵袭迁移实验验证过表达细胞的侵袭迁移能力变化。然后,对HBx过表达细胞以及对照组细胞进行全转录组高通量测序,筛选表达差异明显的circRNA,预测可能与其结合的miRNA和mRNA,并通过实时荧光定量PCR（qPCR）的方法对测序结果进行进一步验证,在确定circCYP24A1为候选的circRNA后,我们对40例临床样本用qPCR验证circCYP24A1在肝癌与癌旁组织中是否存在表达差异,并再次对HBx过表达细胞系进行慢病毒转染,敲低circCYP24A1的表达并观察细胞的上皮-间质转化过程有无下降,即观察细胞表型,EMT相关蛋白指标以及细胞侵袭迁移功能的变化。接着,我们在对HepG2细胞过表达circCYP24A1,观察上皮-间质转化过程是否再次发生。由此明确circCYP24A1在HBx介导的肝细胞癌上皮-间质转化中的作用。同时,我们测定circCYP24A1的qPCR产物进行TA克隆测序,验证circCYP24A1是否存在环状特性,并通过Fish荧光原位杂交技术对circCYP24A1进行定位,观察其是否可以在包浆中表达。最后,通过双荧光素酶报告基因实验进一步确定circCYP24A1可否通过与miR-506的结合,形成ceRNA机制,参与肿瘤的侵袭转移。结果:在对HepG2细胞进行慢病毒转染过表达HBx后,HepG2细胞发生了上皮-间质转化过程,E-钙黏蛋白表达量降低,N-钙黏蛋白和波形蛋白表达升高,细胞表型趋向于间质表型,侵袭迁移功能增强（P<0.05）。通过高通量测序得到的circCYP24A1在qPCR验证时HBx过表达组表达确实明显高于对照组,所预测与之结合的miRNA-506过表达组表达低于对照组,Snail2过表达组表达相应高于对照组（P<0.05）,与测序结果一致。对40例临床样本qPCR分析得出,circCYP24A1在肝细胞癌组织中的表达量明显高于癌旁组织（P<0.05）,且在对circCYP24A1进行慢病毒敲减后HBx过表达细胞的上皮-间质转化过程得到了抑制,细胞侵袭迁移功能减低（P<0.05）,对HepG2细胞再次过表达circCYP24A1后,上皮-间质转化过程再次发生。在对circCYP24A1的qPCR产物进行TA克隆测序后我们验证了circCYP24A1的环状特征。同时Fish荧光原位杂交也提示circCYP24A1主要在包浆中表达,且双荧光素酶报告基因实验证实circCYP24A1可与miR-506特异性结合,通过分子海绵作用抑制miR-506的作用并促进肝细胞癌的上皮-间质转化过程。结论:以上结果揭示了HBx可以通过高表达circCYP24A1抑制miR-506对肝细胞癌上皮-间质转化的抑制作用,从而促进肝细胞癌的上皮-间质转化作用,介导肿瘤的侵袭转移。
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目的:甲状腺癌为头颈部常见的恶性肿瘤,占头颈部恶性肿瘤的5.11%。研究表明,甲状腺癌包括甲状腺乳头状癌（thyroid papillary carcinoma,PTC）,甲状腺滤泡癌（thyroid follicular carcinoma,FTC）,低分化甲状腺癌（poorly differentiated thyroid carcinoma,PDTC）,未分化甲状腺癌（undifferent
背景:胰腺癌（pancreatic cancer,PC）起病隐蔽,通常无或少有早期症状,大多数患者确诊即为中晚期,患者预后极差,五年生存率不足8%。胰腺癌的传统治疗受限颇多,早期胰腺癌可切除,但术后复发率和远端转移率极高,中晚期患者难以进行手术切除,且大部分患者对放疗不敏感,化疗疗效同样有限。近年来新兴的靶点治疗正成为研究热点,而胰腺癌的转移侵袭是影响患者预后的重要因素。因此,进行胰腺癌转移侵袭机
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目的:乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤。对于局部晚期乳腺癌来说新辅助化疗不仅可以改善达到病理学完全缓解（pCR）患者的预后,且可以使原本不能进行手术的患者获得手术机会。乳腺MRI作为评价新辅助化疗疗效的一种有效手段得到广泛认可。但对于MRI下达到影像学完全缓解（rCR）的患者能否准确评价pCR,且这种rCR能否预测患者的预后还不得而知。另外,对于经新辅助化疗后未能达到pCR的患者,尤其是预后评价较差的
目的:结直肠癌（Colorectal cancer,CRC）是一种在结肠和直肠组织中形成恶性肿瘤的疾病。CRC是全球第三大常见的恶性肿瘤,并且是癌症相关死亡的第四大主要原因。根据对CRC患者的检测报道,2018年全球约有1,800,977例新发病例和861,663例死亡病例。在临床治疗手段中,CRC患者的治疗方案包括手术切除、靶向治疗、化学疗法、放射疗法以及免疫疗法等。尽管近几十年来在临床治疗方面
前言:胃蛋白酶原C（Pepsinogen C,PGC）是由胃内主细胞分泌的一种天冬氨酸蛋白酶,在胃内的酸性条件下激活为有活性的胃蛋白酶C而具有消化胃内蛋白质的功能。编码PGC蛋白的人PGC基因定位于6p21.1,完整的人PGC基因共含9个外显子和8个内含子,全长10.7kb。PGC蛋白出现于胚胎发育晚期,主要表达于胃部,是胃粘膜细胞分化成熟的终末产物,是消化功能逐渐成熟的标志。PGC在正常胃粘膜是
目的:胶质瘤是神经系统中最常见的恶性肿瘤,约占颅内原发性肿瘤的40%～50%。尽管进行积极的手术治疗,并在术后辅以放、化疗,但胶质瘤患者的预后并没有得到明显的改善,因此,分子靶向治疗有望成为一种新的胶质瘤治疗策略。RNA结合蛋白（RNA binding protein,RBPs）是一类重要的基因转录后调控蛋白,通过与特异性靶RNA结合,参与调控RNA分子的剪接、降解和稳定性等代谢过程,在细胞增殖、