湖羊ESR基因的检测及基因型与多胎性能的关系

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雌激素受体(estrogen receptor, ESR)是一种配体激活转录因子家族中的核酸受体。研究报道,猪雌激素受体基因中的优势等位基因B基因可能与猪的高产仔数密切相关,利用该优势等位基因进行育种,可加速猪群的遗传进展。已有研究结果表明,ESR基因可能是控制小尾寒羊多胎性能的一个主效基因或与之存在紧密的遗传连锁。但目前尚无研究证实湖羊ESR基因的群体遗传效应及ESR基因的多态性与湖羊产羔数的相关性。本研究拟克隆湖羊ESR基因,应用PCR-SSCP、实时荧光PCR方法研究湖羊ESR基因多态性及其群体遗传学特征;通过数量遗传学分析方法研究ESR基因的多态性与湖羊产羔数的相关性;并建立湖羊ESR基因的实时荧光PCR检测方法。1.应用PCR-SSCP技术分析高繁殖力绵羊品种湖羊的雌激素受体基因第一外显子部分序列的单核苷酸多态性。结果表明:湖羊ESR基因存在3种基因型:野生纯合型(AA)、突变纯合型(BB)、突变杂合型(AB)。2.对检测到的纯和基因型(AA、BB)进行克隆测序,BB基因型和AA基因型相比,BB基因型检测到1处碱基突变(C→G)。比对BB基因型序列与GenBank(登录号:X98010)公布的绵羊ESR基因的第一外显子序列,仅在第363位点有突变(C→G),其余各碱基序列相同。3.检测56只湖羊ESR基因的多态性,其中AA型为15只,AB型为32只,BB型为9只。统计结果显示,A基因频率为0.554,B基因频率为0.446,AA基因型频率为0.262,AB基因型频率为0.571,BB基因型频率为0.161,表明了湖羊ESR基因的多态性。经x2检验表明,湖羊群体的基因频率和基因型频率都达到了Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05)。揭示ESR基因这个位点可能不受选育措施的影响,在选育过程中的遗传仍然是随机的。4.结果表明,湖羊ESR基因AB或BB基因型产羔数分别比AA基因型多0.98只(P<0.01)、1.47只(P<0.01),湖羊产羔数的最小二乘平均值分别为AA型1.20,AB型2.18,BB型2.67。湖羊产羔数的数量统计显示,该湖羊群体的AA型与BB型之间产羔数差异极显著(P<0.01),AA型与AB型之间产羔数差异极显著(P<0.01),BB型与AB型之间产羔数差异显著(P<0.05),ESR基因的B等位基因与湖羊高产羔数呈显著正相关。同时湖羊ESR基因的B等位基因对A等位基因的显性度为0.333。5.随机选用PCR-SSCP技术测得的ESR基因的AA、BB和AB三种基因型的样品各8个,进行SYBR GreenⅠ实时荧光PCR方法检测,并分析其溶解曲线和Tm值。检测结果显示,实时荧光PCR方法可检测出所有的BB基因型和AB基因型样品,和7个AA基因型的样品,检测率达96%。上述结果证实,ESR基因可能是控制湖羊多胎性能的一个主效基因或是与之存在紧密的遗传连锁,并建立了湖羊ESR基因实时荧光PCR方法群体检测技术,可为应用早期选育提高湖羊的繁殖性能提供理论依据和技术途径。
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