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目的:本研究以DEHP为受试物,以GC-2spd细胞为研究对象,研究孤核受体TR4介导线粒体通路在DEHP诱导GC-2spd细胞凋亡中的作用,揭示DEHP诱导生精细胞凋亡的机制。方法:用DMSO溶解DEHP,不同浓度的DEHP染毒GC-2spd细胞,分为低(50μmol/L)、中(100μmol/L)、高(200μmol/L)三个剂量组。1、采用流式细胞仪检测GC-2spd细胞凋亡情况。2、采用Real-time PCR检测细胞Bcl-2、Bax、Cyt-C、caspase-9、caspase-3等m RNA的转录水平。3、Western Blot检测细胞TR4、Bcl-2、Bax、Cyt-C、procaspase-9、procaspase-3等蛋白表达水平。结果:1.GC-2 spd细胞凋亡的变化情况:中、高剂量组细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.05),但低剂量组与对照组比较差异不明显。2.各染毒组Bax、Cyt-C caspase-9、caspase-3 m RNA转录水平均升高,其中低、高剂量染毒组的Bax和caspase-9与中、高剂量染毒组的Cyt-C,中剂量组的caspase-3与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),Bcl-2 m RNA转录水平下降,并且所有染毒组的Bcl-2与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。3.各染毒组TR4、Bcl-2、procaspase-3、procaspase-9蛋白表达水平均降低,Bax和Cyt-C蛋白表达水平升高,其中高剂量组Bcl-2、中、高剂量组procaspase-3、中、高剂量组procaspase-9、高剂量组Bax、高剂量组Cyt-C与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:DEHP可通过TR4调控线粒体途径,抑制Bcl-2蛋白的表达,增加细胞色素C蛋白的表达,激活caspase-9,引起caspase-3的活化,最终导致生精细胞的凋亡。