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目的:利用EGFR19外显子15,18碱基缺失和21外显子L858R突变的生物学特性,以及PCR等技术对上述突变基因进行富集,研发出两种快速、简便、灵敏的检测方法,提高肺癌的靶向治疗。方法:博来霉素抗性基因是一种广泛用于筛选质粒成分的报告基因。当博来霉素报告基因中插入一段外源基因序列时,若插入片段含有终止密码子,则博来霉素抗性基因失活;若插入的外来片段不含有终止密码子,则博来霉素抗性基因的阅读框架得以保留,抗性基因仍具有活性。EGFR基因19外显子Del E746-A750,Del L747–S752 ins S缺失突变型不包含TAA碱基序列,利用PCR技术调整阅读框使插入野生序列片段的阅读框形成终止密码子TAA。将上述野生型和缺失突变型DNA插入到p ZAmp B质粒的博来霉素抗性基因序列中,再将重组质粒转化到大肠杆菌中,野生型菌落在含有博来霉素的培养板上不生长,而突变型含有博来霉素的培养板上菌落在生长。另外,L858R由GGCTGG>GGCGGG,利用Taq DNA聚合酶引入酶切位点。野生型变成GGATGG含有Bse GI酶切位点,而突变型GGAGGG不含该酶切位点。利用基因型转换开关技术(PCR耦合限制性内切酶)检测该位点突变,敏感性较高。结果:利用博来霉素作为报告基因检测EGFR19外显子15和18缺失突变,敏感性可以达到0.1%,利用基因型转换开关检测L858R突变灵敏度高达0.01%,上述结果经Sanger’s测序测序验证为可靠结果,可用于ct DNA的稀有突变检测。结论:利用博来霉素作为报告基因检测EGFR19外显子缺失突变以及基因型转换开关检测L858R突变的方法敏感性高,操作简单,可用于临床ct DNA稀有突变的检测。