离子液体双水相体系的构建及其萃取蛋白质的研究

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蛋白质是一种复杂的有机化合物,是由氨基酸分子呈线性排列所形成,相邻氨基酸残基的羧基和氨基通过肽键连接在一起。蛋白质是对生命至关重要的一类生物大分子,在生命有机体催化、运动、结构识别和调节等许多方面扮演重要的角色。关于蛋白质的萃取分离一直是人们研究的热点,然而传统萃取剂为有机溶剂,挥发性大、毒性强、环境污染严重。因此,开展绿色、安全、高效的新型萃取剂研究具有重要的理论意义和应用价值。近年来,离子液体双水相体系作为一种新型的萃取分离体系,在萃取分离方面受到广泛的关注。本论文主要研究了几种由离子液体与无机盐组成的离子液体双水相及其对蛋白质的萃取性能。实验结果表明,不同离子液体对蛋白质的萃取能力依次为:[Bmim]Cl>[Bmim]Br>[Bpy]Cl。其中,在[Bmim]Cl/K2HPO4双水相中对木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶的萃取率分别达到了98.33%和97.35%。实验中系统考察了离子液体用量、无机盐用量、体系温度和pH值等因素对不同离子液体双水相体系对蛋白质萃取能力的影响。得出实验结果概括如下:(1)在萃取体系中,随着离子液体用量的增加,在[Bmim]Cl/K2HPO4双水相体系中,木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶的萃取效率呈现出先增大随后降低的趋势;在[Bmim]Br/K2HPO4双水相体系中,木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶的萃取效率呈上升趋势;而在[Bpy]Cl/K2HPO4双水相体系对木瓜蛋白酶的萃取率几乎不变。(2)在萃取体系中,随着磷酸盐用量的增加,[Bmim]X(X=Cl,Br)/K2HPO4双水相体系对木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶的萃取率不断降低,但降低趋势较为平缓;而[Bpy]Cl/K2HPO4双水相体系对木瓜蛋白酶的萃取率也不断降低,且降低趋势明显。(3)随着体系温度的升高,[Bmim]X(X=Cl,Br)/K2HPO4双水相体系对木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶的萃取率略有增大;而[Bpy]Cl/K2HPO4双水相体系对木瓜蛋白酶的萃取率先增大后降低,且增大和降低趋势平缓。(4)随着体系pH值的变化,木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶在3种离子液体双水相中呈现出相同的趋势,即溶液pH值在目标蛋白的等电点(pI)附近时,对目标蛋白的萃取效果最好。
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