论文部分内容阅读
目的:了解原发性肝细胞癌患者肝脏微环境中免疫细胞的浸润及部分细胞因子的分泌情况。方法:1.收集76例原发性肝细胞性肝癌(HCC)患者经手术切除的肝癌组织(距癌边缘<1cm)及非癌肝组织(距肿瘤边缘>5cm)标本,除去其中血污及坏死组织,用组织样本制备仪充分匀浆,离心,保存上清,用流式细胞仪分别检测肝癌组织、非癌肝组织中免疫细胞,包括总T淋巴细胞及其亚群CD4+T细胞、CD8+T细胞、Treg细胞,B淋巴细胞、NK细胞,巨噬细胞的数量。2.同时运用免疫组化法对其中30例标本进行相应的上述免疫细胞的分布进行检测。3.运用CBA法检测上清中Th1/Th2类细胞因子,ELISA法检测TGF-β1、VEGF。4.结合临床指标,运用统计软件对数据进行统计分析。结果: 1.流式结果显示HCC病人中CD3+ T细胞,CD3+CD4+ T细胞,CD4+CD25+CD127-调节性T细胞及CD3+CD45RO+、CD8+CD45RO+记忆性T细胞在癌组织中的比例均高于相应的非癌组织(P<0.005;P<0.001; P<0.001; P<0.001; P<0.001),CD3+CD8+T细胞在癌组织中的比例低于相应的非癌组织(P<0.001);癌组织中早期活化因子CD69在CD3+T淋巴细胞及CD56+NK细胞上表达的比例均低于相应的非癌组织(P<0.005;P<0.001),而晚期活化因子HLA-DR在CD3+T细胞表达的比例在癌组织高于相应的非癌组织(P<0.005)。2.免疫组化结果也显示肿瘤组织中CD3+T细胞、CD4+T细胞、FoxP3+调节性T细胞及CD45RO+记忆性T细胞在癌组织中的数量高于相应的非癌组织(P均<0.05),CD8+细胞在癌组织中的数量低于相应的非癌组织(P<0.05);另外组化还提示肿瘤组织中CD68+巨噬细胞及CD56+NK细胞在癌组织中的阳性率低于相应的非癌组织(P<0.001;P<0.05)。3.细胞因子检测发现IL-10、TGF-β1及VEGF的表达在癌组织高于相应的非癌组织(P<0.005;P<0.001),且癌组织中VEGF的水平与肿瘤大小成正相关。4.癌组织中,CD4+CD25+CD127- Treg细胞与CD4+T细胞或CD8+T细胞的表达呈负相关(P均<0.05),而与TGF-β1或IL-10的表达呈正相关(P均<0.05)。5.癌组织中,<60岁年龄组的CD3+CD4+T细胞、CD4+CD25+CD127-Treg细胞比例高于>60岁年龄组(P<0.005;P<0.05),而CD3+CD8+T细胞比例低于>60岁年龄组(P<0.05);HBsAg及HBeAg阳性患者癌组织中CD4+CD25+CD127-Treg细胞高于相应的HBsAg、HBeAg阴性组,后者差异有统计学意义(P<0.05)。所检测的免疫细胞的数量与肿瘤的大小、有无侵犯血管、TNM分期、组织学分级、是否合并肝硬化、术前ALT/AST水平等均无关。结论:1.肿瘤的发生发展可导致淋巴细胞在肿瘤组织的浸润。尽管肝癌组织中CD3+ T及CD4+ T细胞比例增高,但在抗肿瘤反应中起主要作用的CD8+ T细胞比例却明显下降,而对免疫起抑制作用的Treg细胞比例却增加,同时T细胞及NK细胞的活化受到抑制,导致肿瘤微环境免疫状态的抑制。2.肝癌组织中,巨噬细胞可能主要以M1型为主,并发挥抗肿瘤作用。3.肝癌组织中游离的细胞因子以细胞免疫抑制因子为主,IL-10、TGF-β1及VEGF表达增高,抑制肿瘤微环境的免疫状态。