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目的:本研究选择ERK作为靶基因,利用自身给药大鼠模型较好的模拟人的成瘾和复吸的过程,探索相关rno-miRNA对ERK基因表达以及海洛因复吸行为的影响,并初步探讨可能的分子机制。方法:1、本研究通过在线数据库预测并与实验室的miRNA基因芯片比对,筛选出可能调控ERK基因的rno-miRNA,并利用q RT-PCR和双荧光素酶实验在分子水平和细胞水平进行验证。2、本研究主要通过在自身给药模型大鼠伏隔核脑区微注射rno-miR-21-5p、rno-miR-320-3p和si RNA慢病毒,感染14天之后进行2小时的海洛因线索诱导复吸行为测试,立即断头取伏隔核脑区,进行Western Blot和q RT-PCR实验分析。结果:1、通过对比分析筛选出rno-miR-21-5p和rno-miR-320-3p与ERK2存在结合位点,细胞水平验证出两者均与ERK2 3`UTR结合并抑制其表达;分子水平上验证出rno-miR-21-5p在成瘾和复吸阶段表达均高于对照组,但rno-miR-320-3p在成瘾组表达高于对照组,而复吸组低于成瘾组,总体都高于对照组。2、行为学实验结果显示,抑制rno-miR-21-5p后LV-miR-21-5p inhibition组中海洛因复吸行为升高(p<0.05);过表达rno-miR-320-3p后LV-miR-320-3p组中海洛因复吸行为降低(p<0.05);且过表达si RNA-ERK后LV-si RNA-ERK组中海洛因复吸行为降低(p<0.01)。3、分子水平实验结果显示,抑制rno-miR-21-5p后LV-miR-21-5p inhibition组中miR-21-5p的相对表达量降低(p<0.05),ERK2 m RNA的相对表达量并无统计学意义[F(2,23)=0.829,p=0.449],但pERK蛋白的表达量升高(p<0.01);过表达rno-miR-320-3p后LV-miR-320-3p组中miR-320-3p的相对表达量上升(p<0.01),ERK2 m RNA的相对表达量没有统计学意义[F(2,16)=3.087,p=0.073],但p-ERK蛋白的表达量降低(p<0.01);过表达si RNA-ERK后LV-si RNA-ERK组中ERK2 m RNA表达量均显著降低(p<0.01),p-ERK蛋白的相对表达量降低(p<0.01)。结论:本实验发现海洛因自身给药戒断复吸后大鼠NAc脑区中rno-miR-21-5p表达显著升高而rno-miR-320-3p表达显著降低;抑制rno-miR-21-5p后能明显增强大鼠线索诱导的海洛因复吸行为,而过表达rno-miR-320-3p则降低大鼠线索诱导的海洛因复吸行为。结果提示大鼠NAc中rno-miR-21-5p和rno-miR-320-3p的表达均介导了线索诱导的海洛因复吸过程。通过细胞水平的双荧光素酶报告基因实验和在体si RNA干扰实验均证明,rno-miR-21-5p和rno-miR-320-3p可能共同靶向调节ERK2信号分子的表达从而参与线索诱导的海洛因复吸行为,初步探索了调控ERK2靶基因的rno-miR-21-5p和rno-miR-320-3p在海洛因复吸中作用的部分机制,并为临床寻找治疗海洛因成瘾与复吸相关的生物标志物和药物靶标提供重要的实验依据。