毛细管电泳—电化学发光在临床检验中的应用探索

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目的:建立CE-ECL方法检测血浆中顺苯磺酸阿曲库铵及顺苯磺酸阿曲库铵的代谢物;建立CE-ECL间接检测法,检测儿茶酚胺(CA)和其代谢产物间甲肾上腺素类物质(MNs),应用于嗜铬细胞瘤的诊断。方法:1.以罗库溴铵作为内标,用高氯酸沉淀血浆蛋白,利用序贯均匀设计法考察分离条件,建立CE-ECL法对顺苯磺酸阿曲库铵及其代谢物进行分离检测。检测时所用分离缓冲液为含12%乙腈的24mmol/L磷酸缓冲液(PBS)(pH2.9),分离电压设为13kV,进样电压为16kV,进样时间为3s。ECL检测池中为含2mmol/L三联吡啶钌(Ru(bpy)23)的100mmol/L PBS(pH8.5)。2.利用猝灭电化学发光法对肾上腺素类物质进行检测,检测时所用分离缓冲液为含6μmol/L三丙胺(TPA)的30mmol/L PBS(pH7.9),分离电压为17kV,进样电压为16kV,进样时间为5s。ECL检测池中为含0.5mmol/L Ru(bpy)23的100mmol/L PBS缓冲液(pH8.5)。3.利用甲醛对间甲肾上腺素类物质进行衍生,使一级胺和二级胺变为三级胺,提高其灵敏度,并用硼酸盐缓冲体系作为背景,消除其酚基的猝灭效果,进一步提高信号进行检测。检测时所用分离缓冲液为100mmol/L硼酸盐缓冲液(pH8.5),分离电压为17kV,进样电压为16kV,进样时间为10s。ECL检测池中为含2mmol/L Ru(bpy)23的50mmol/L硼酸盐缓冲液(pH8.5)。结果:1. CE-ECL检测阿曲库铵的线性范围为0.100~40.0mg/L,劳丹素的线性范围为0.040~8.0mg/L,所有成分检测的迁移时间和ECL信号变异系数均小于3%,平均回收率为94.5~101.6%。2. CE-ECL猝灭法检测肾上腺素和去甲肾上腺素的线性范围分别为33.0~3333.0μg/L and18.0~3380.0μg/L,可用于嗜铬细胞瘤病人尿液样品肾上腺素类物质的分析。3. CE-ECL法检测间甲肾上腺素类物质的线性范围为40.0~4000.0μg/L,可用于嗜铬细胞瘤病人尿液样品间甲肾上腺素类物质的分析,以及部分嗜铬细胞瘤病人的血浆样品检测。结论:本课题建立了CE-ECL检测血浆中顺苯磺酸阿曲库铵及其分解产物的方法,为顺苯磺酸阿曲库铵的药代动力学研究提供了极为简便的方法。初步建立了CE-ECL间接检测儿茶酚胺类物质及其代谢产物间甲肾上腺素类物质的方法,可以用于嗜铬细胞瘤病人尿液标本的检测。
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