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猪流感（swine influenza,SI）的病原通常为正粘病毒科、流感病毒属的A型流感病毒,可引起猪高热、咳嗽和呼吸困难等症状,该病发病率高、病死率低,所以并没有引起人们对猪群免疫的重视。研究发现,猪呼吸道上皮细胞既含有人流感病毒受体又含有禽流感病毒受体,这意味着人流感和禽流感都能传播给猪,而猪流感也能传播给人和禽类。因此,做好猪流感的防护工作对阻止流感病毒的跨种间屏障传播、阻击流感全球范围内大流行、维护公共卫生方面意义重大。目前控制和预防流感流行与传播的主要手段是疫苗接种,市面上使用的疫苗以灭活疫苗为主,灭活疫苗的安全度高,特异性较强,同时存在生产周期长、生产工序复杂、不易产生局部免疫反应等缺点。在免疫学上冷适应减毒流感疫苗要优于灭活疫苗,通过鼻腔途径免疫,可诱导粘膜免疫、体液免疫和细胞免疫反应,产生交叉免疫保护力,对异源病毒的攻击提供有效保护。本实验通过对猪流感病毒EA H1N1亚型GX18ca株在适宜温度和限制温度下EID50的比较,鉴定出具有其冷适应和温度敏感特性;对全基因组测序发现,与亲本野生型毒株相比,GX18ca株共有六个位点发生氨基酸变化,分布在PB2、PB1、HA、NA基因上,与以往报道的冷适应供体株的突变位点均不相同。同时,小鼠感染性试验发现,GX18ca株攻毒后小鼠鼻甲中无病毒复制,肺脏中的病毒滴度显著低于亲本野生型毒株,肺脏的HE染色石蜡切片显示未见明显病理变化,由此表明GX18ca株在小鼠体内高度致弱,有良好的安全性。我们将GX18ca株作为弱毒疫苗候选株,进行攻毒保护试验,评价其安全性和有效性。根据本实验室流行病学调查和遗传演化分析,选取H1N1/2009和EA H1N1代表毒株A/Sichuan/1/2009（H1N1）与A/swine/Liaoning/972/2016（H1N1）为攻毒毒株,根据血清学结果初步判断A/swine/Gua ngxi/18/2011（H1N1）、A/swine/Liaoning/972/2016（H1N1）与A/Sichuan/1/2009（H1N1）毒株之间抗原性存在差异。结果表明,GX18ca冷适应毒株不仅可以抵抗同谱系A/swine/Liaoning/972/2016（H1N1）病毒的攻击,而且还可以抵抗异谱系流感病毒A/Sichuan/1/2009（H1N1）的攻击;我们以106EI D50/mL的剂量免疫小鼠,HI和中和抗体检测结果表明小鼠血清中针对异谱系流感病毒的效价较低,但ELISA试验结果表明该疫苗可诱导全身性的体液免疫和局部的粘膜免疫,且粘膜抗体的交叉反应活性比全身反应要强;用流式方法检测相关特异性T细胞数量,结果表明,与对照组相比,该疫苗株可诱导大量针对异源毒株的特异性T细胞,激发细胞免疫反应。本实验以EA H1N1亚型猪流感病毒GX18ca株为模式病毒并对其免疫保护效果进行了初步的探索,研究表明,该毒株具有良好的安全性和免疫原性,可提供针对EA H1N1亚型以及H1N1/2009亚型流感病毒交叉免疫保护,对新型流感弱毒疫苗的开发和深入了解冷适应弱毒疫苗的免疫保护机制提供了新的思路。