果蝇PCNA蛋白的原核表达、初步晶体学研究与结构分析

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增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen,PCNA),在DNA复制、DNA损伤修复、细胞周期调控、染色质新陈代谢等生理活动中发挥重要作用。为获得全长的PCNA的晶体结构,本研究对果蝇源的PCNA在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,并采用亲和层析、凝胶过滤层析进行纯化,获得状态稳定均一、纯度高、适于结晶的蛋白。蛋白结晶后运用X射线晶体衍射方法进行了初步晶体学分析,所得晶体分辨率达2.0(A),属于H3空间群,晶胞参数a=b=115.16(A),c=38.28(A),α=β=90°,γ=120°。果蝇PCNA蛋白晶体结构由分子置换的方法确定,以首尾相接的方式形成一个对称的同源三聚体,N-端和C-端结构域通过结构域间连接环连接,另外N-端和C-端结构域也通过疏水作用力相互结合。与人源的PCNA相比,果蝇PCNA的结构域间连接环存在构象上的变化,这为两者功能上的差异提供了依据。本研究为深入研究PCNA的功能提供了结构生物学基础。
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