目的探讨肺炎克雷伯菌性肝脓肿(Klebsiella pneumoniae liverabscess,KPLA)的临床特征及其菌株的分子流行特点,以便对KPLA的临床诊断和治疗提供理论指导。方法212株肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,KP)分离自2013年11月～2019年12月期间在青岛大学附属医院住院的患者。其中,分离自130例肝脓肿患者的130株KP归为LA-KP组(Liver Abscess-Causing Klebsiella pneumonia),分离自82例非肝脓肿患者的82株KP归为n LA-KP组(non-Liver Abscess-Causing Klebsiella pneumonia)。所有菌株的鉴定及药敏实验使用法国梅里埃Vitek-2 Compact系统进行。菌株的高粘液表型检测采用粘液丝试验。菌株的荚膜血清型基因K1、K2和K5及毒力基因rmpA、aerobactin、peg-344和iucA通过聚合酶链式反应(PCR)进行扩增和测序确认。脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分型(MLST)方法分析引起肝脓肿的130株KP的同源性,并通过S1核酸酶切脉冲场凝胶电泳(S1-PFGE)检测菌株携带的质粒。基于二代Miseq测序平台获取3株LA-KP菌的iucABCD-iutA基因座序列,并利用软件分析。肝脓肿患者的临床资料分析采用回顾性方法。数据统计学分析使用SPSS 23.0软件。结果(1)本次研究中的130例KPLA均为社区获得性感染,患者的中位年龄58(51～65.25)岁,以男性(64.62%)多见,发热(93.84%)为最常见的临床表现,糖尿病(49.23%)为最多见的基础疾病。(2)CT显示,肝脏脓肿灶多位于肝右叶(76.15%),多单发(82.31%),最大直径范围以5～10 cm(60.00%)多见,其中31例(23.85%)可见气体。(3)在130例KPLA患者中,白细胞计数、中性粒细胞计数、C-反应蛋白、丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶、总胆红素、直接胆红素、血清白蛋白、空腹血糖等指标异常者分别为68.46%、77.69%、100%、50.81%、34.68%、31.45%、39.66%、56.69%及65.38%。另外,在130株KPLA患者分离的KP菌株中,除了2株产超光谱β-内酰胺酶(ESBLs)外,另外128株菌对多种临床常见的抗菌药物都敏感。(4)菌株的粘液丝试验阳性率在LA-KP组和n LA-KP组中分别为91.54%(119/130)和32.93%(27/82),两组之间差异具有统计学意义(P<0.05),该实验对KPLA诊断的准确度为82.08%。(5)PCR结果显示,K1、K2和K5荚膜血清型基因阳性的菌株在LA-KP组中分别占66.15%(86/130)、16.15%(21/130)和2.31%(3/130),而在n LA-KP组中依次为19.51%(16/82)、10.98%(9/82)和1.22%(1/82),K1、K1/K2、K1/K2/K5在LA-KP和nLA-KP中的分布差异均具有统计学意义(P<0.05),而且K1/K2/K5三种血清型联合检测诊断KPLA的准确度高于单一血清型检测。(6)在LA-KP组中,毒力基因aerobactin、rmpA、peg-344同时阳性者占98.46%(128/130),iucA基因阳性率达100%(130/130),而在n LA-KP组中,这四个毒力基因阳性率依次为43.90%(36/82)、45.12%(37/82)、43.90%(36/82)和46.34%(38/82),四个毒力基因在两组中分布差异均具有统计学意义(P<0.05),诊断LA-KP的准确度约82%。此外,相比非高粘液表型及其他荚膜血清型的菌株,高粘液表型及K1、K2荚膜血清型的菌株具有更高的毒力基因携带率。(7)MLST显示130株LA-KP共分为27个型别,主要为ST23型(47.69%,62/130),其次为ST700型(16.92%,22/130)。(8)PFGE显示130株LA-KP共分为17群,A群(48.46%,63/130)菌株数最多,以K1/ST23为主,其次为B群(17.69%,23/130),以K1/ST700为主。(9)S1-PFGE显示,多数LA-KP菌株携带1个质粒(72.31%,94/130),大小以220kb(64.62%,84/130)为主,此外,还有部分菌株携带两个质粒(16.15%,21/130)或不携带质粒(11.54%,15/130)。(10)生物信息分析显示,菌株LA-KP019(NK/ST29)和LA-KP029(K1/ST23)的iucABCD-iutA基因座序列与参考质粒pK2044和p LVPK呈现100%的相似度,然而LA-KP046菌株(K1/ST700)的该基因座中除了iucA、iucB和iucC的核苷酸序列与前4个菌株完全一致外,其iucD基因的3’端核苷酸序列较其他菌株有57bp的延长,并且其iutA基因与其他菌株仅有92%的序列相似度。结论(1)KPLA最常见的临床表现是发热,多为肝右叶的单发病灶,常伴有糖尿病,而且多数分离株对临床常用抗生素敏感,因此,抗菌药物治疗时应优先考虑窄谱抗生素。(2)菌株的高粘液表型可以作为KPLA诊断的初筛指标,K1作为最主要的荚膜血清型与K2和K5的联合检测对诊断KPLA的准确度比单一血清型高,也具有辅助诊断价值。(3)与毒力相关的基因aerobactin、rmpA、peg-344和iucA在LA-KP组中的检出率较高,而且具有高粘液表型和K1、K2荚膜血清型的KP呈现较高的毒力基因携带率,这表明菌株粘液表型、荚膜血清型和毒力基因与KP引起肝脓肿的致病性相关联。(4)本研究中,LA-KP组以K1/ST23型KP为主,但出现了数量上仅次于前者的K1/ST700型,并且近年来检出例数逐渐增多,这与既往报道不同,应引起注意。(5)在LA-KP组中,多数菌株仅携带一个质粒,但少数未携带质粒的菌株也可检测到毒力基因,表明部分菌株的毒力基因可位于染色体上,即毒力基因具有潜在的横向和垂直传播的风险。(6)LA-KP046菌株(K1/ST700)的iucD和iutA基因序列与pK2044、p LVPK和LA-KP029(K1/ST23)菌株均不一致,这种差异是否会影响K1/ST700型菌株的毒力表达,从而与该型别在本院KPLA患者中的检出数逐渐增多有关,还有待于进一步研究证实。