论文部分内容阅读
本文以白桦(Betula platyphalla)5个优良无性系为研究材料,取叶片作为外植体,用IS附加不同浓度的BA作为培养基,对白桦愈伤组织再生途径的快繁系统进行了研究;同时对愈伤组织及其再生植株的染色体数目变异进行了研究,对基因组DNA变异进行了AFLP分析,结果如下: 1.筛选出IS+(3～5mg/L)BA+0.5mg/L KT+2%蔗糖是诱导白桦愈伤组织繁殖的最优培养基,诱导率达到80%以上;诱导产生的愈伤组织,在IS+0.4mg/L BA+2%蔗糖分化培养基中出芽率高达90%以上。 2.建立了白桦叶片直接出芽的再生系统:即在IS+(10.0～15.0mg/L)BA+0.5mg/L KT+2%蔗糖诱导20天,然后在IS+0.4mg/L BA+2%蔗糖分化培养基中培养15天能达到直接出芽,每片叶片的丛生芽多达20～30个,质量较高。 3.体细胞无性系的染色体数目变异模式:利用BA诱导的愈伤组织及其再生植株的染色体数目均发生不同程度的变异,随着BA浓度的增加,再生植株二倍体细胞比例由50%逐渐下降到39.75%;由5.0mg/LBA诱导的愈伤组织再生植株与对照相比染色体数目变异较小,变异率为40.75%;另外,随着继代培养时间的增加,再生植株二倍体细胞比例由57%剧减到30%。 4.体细胞无性系的DNA水平变异模式:随着BA浓度的提高,再生植株的DNA多态性片段的比例明显提高,由BA低浓度时的38.73%上升到高浓度时的61.33%;继代1～5次的再生植株多态性片段比例依次为61.78%、74.91%、76.13%、72.51%和78.81%,这表明随着继代次数的增加,再生植株的DNA多态性片段比例逐渐上升,变异逐渐加大。 5.通过细胞学观察和DNA水平分析,确定高浓度激素和继代次数的增加是导致白桦体细胞无性系变异产生的重要原因。 6.完善了适合于白桦总DNA多态性分析的AFLP技术,筛选出适合于白桦AFLP分析的13对引物组合。 7.选出IS+5.0mg/L BA+0.5mg/L KT+2%蔗糖是使白桦快速繁殖,再生植株变异较小的培养基,其再生植株继代培养应控制在5代以内。 8.建立了白桦愈伤组织染色体制片技术:即取培养一周的愈伤组织,用0.2%的秋水仙素预处理1.5～2h,固定后用1N HCl在室温(18～20℃)解离10～15min或室温下用2%纤维素酶和果胶酶混合液酶解30min,压片后易获得分散、染色效果好的细胞分裂中期染色体图象。 9.初步建立了白桦愈伤组织化学诱变技术:在高浓度EMS短时间处理和低浓度EMS长时间处理条件下可获得到叶柄、叶片愈伤组织的半致死剂量:通过观察半致死剂量下愈伤组织细胞的染色体数目发现,诱变后细胞中单倍体、非整倍体及多倍体细胞比例均显著高于对照,总变异率由诱变前60%提高到89.93%,这说明EMS对白桦愈伤组织的诱变作用是显著的。