【摘 要】
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与未改性的蛋白质相比,通过高分子改性后的蛋白质分子具有更好的生物相容性、溶解性以及热稳定性等性能,这些优异的特性引起了医学、生物技术、纳米技术等领域研究者们的广泛
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与未改性的蛋白质相比,通过高分子改性后的蛋白质分子具有更好的生物相容性、溶解性以及热稳定性等性能,这些优异的特性引起了医学、生物技术、纳米技术等领域研究者们的广泛关注。但是,蛋白质-高分子的复合物中蛋白质活性降低成为应用中的难题。在本论文中,我们提出了两种解决复合物中酶活性降低的方法,主要内容如下:首先,我们合成了一种带有双硫键与末端基为2-巯基噻唑啉酯官能团的RAFT试剂,随后利用这种RAFT试剂分别合成了生物相容性高分子与温敏性高分子。在温和的反应条件下,通过酰胺反应分别将这两种高分子共价连接到葡萄糖氧化酶的表面,即可以得到两种葡萄糖氧化酶-高分子的复合物。结果表明,当利用还原剂二硫苏糖醇(DTT)将高分子链从葡萄糖氧化酶表面断裂下来后,我们发现酶的活性得到明显恢复。而采用温敏性高分子修饰的葡萄糖氧化酶则表现出不同的性能:当体系温度高于温敏性高分子的最低临界溶解温度(LCST)时,葡萄糖氧化酶的活性较高;当体系温度低于温敏性高分子的LCST时,酶的活性较低;此外,该种复合物经过几个温度循环后,酶的活性几乎没有损失,表明其热稳定性很好。本项研究中我们分别采用核磁谱图(1H NMR)、紫外吸收光谱、聚丙烯酰胺非变形凝胶电泳(PAGE)对上述两种葡萄糖氧化酶酶-高分子的复合物进行了表征与分析。结果显示,本论文中提出的两种方法能够解决由高分子修饰后引起酶活性降低的问题。因此,这些智能的酶-高分子的复合物有望在生物技术和生物医学等领域有极大的应用前景。
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