第一部分脊髓神经性NOS信号通路在鞘内吗啡后处理心肌保护中的作用目的药物后处理(Pharmacological postconditioning,PPOC)是继缺血后处理(Ischemia postconditioning,IPOC)之后对缺血再灌注损伤(Ischemia reperfusion injury,IRI)产生有效保护作用的一项措施。本课题组前期的研究发现鞘内吗啡后处理(Intrathecal Morphine postconditioing,IMPOC)可以模拟IPOC产生心肌保护作用,但其分子和细胞信号通路并不清楚。n NOS/s GC/c GMP信号通路是吗啡在初级感觉神经元中抑制伤害刺激的重要信号通路之一,本研究旨在探讨n NOS/s GC/c GMP信号通路在IMPOC中的心肌保护作用。方法雄性SD大鼠,体重280~320 g,建立鞘内置管和IRI的模型。本研究分为3部分实验完成:1)n NOS/s GC/c GMP信号通路在IMPOC心肌保护中的作用。实验分组:采用随机数字表法分为12组,每组6只:生理盐水对照组(Saline组)、IMPOC 0.3mg/kg组(0.3mg/kg组)、IMPOC 3mg/kg组(3mg/kg组)、IMPOC 30mg/kg组(30mg/kg组)、非选择性NO合成酶抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)+IMPOC组(L-NAME+IMPOC)、神经性NO合成酶抑制剂7-Nitroindazole(7-NI)+IMPOC组(7-NI+IMPOC)、可溶性鸟苷酸环化酶(soluble guanlylyl cyclase,s GC)抑制剂1H-[1,2,4]Oxadiazolo[4,3-a]quinoxalin-1-one(ODQ)+IMPOC组(ODQ+IMPOC)、m阿片受体阻断剂纳洛酮(naloxone,NAL)+IMPOC组(NAL+IMPOC),另设阻断剂自身对照组:L-NAME组、7-NI组、ODQ组、NAL组。2)观察IMPOC对胸段脊髓内n NOS、pn NOS表达水平、总NO、c GMP含量的影响。实验分为10组,每组4只,IMPOC组和Saline组(Control组)在0 min、30 min、60 min、90 min、120 min提取胸段脊髓标本,检测n NOS、pn NOS表达水平和总NO、c GMP含量。3)确认鞘内吗啡后处理心肌保护作用是否通过脊髓n NOS通路介导。根据以上2部分的研究结果,我们发现在鞘内给予吗啡后处理后30min时NO和c GMP含量升高最明显,那么NO和c GMP的升高可否被NOS、n NOS和s CG拮抗剂阻断。实验分为5组,每组4只,分别为Control组,IMPOC组,L-NAME+IMPOC组、7-NI+IMPOC组、ODQ+IMPOC组。观察指标:血流动力学指标、梗死区(Infarct size,IS)体积与缺血危险区(area at risk,AAR)体积的比值(IS/AAR)、不同时间点胸段脊髓内n NOS、pn NOS表达水平、总NO、c GMP含量。统计学方法:所有数据采用均数±标准误(mean±S.E.M)表示,数据变量采用单因素方差分析或者双因素方差分析,两两比较采用Tukey’s多重比较,Dunnett’s多重比较和Sidak’s多重比较。相关性分析采用pearson相关分析。P<0.05为差异有统计学意义。结果与CON组比较,再灌注120 min时IMPOC时MAP明显升高。差异有统计学意义(3mg/kg:64±4mm Hg vs.82±5mm Hg和30mg/kg:64±4mm Hg vs.84±5mm Hg,P<0.05)。在IMPOC前10min,鞘内分别脊髓NOS信号通路抑制剂L-NAME、7-NI、ODQ,结果显示,IMPOC的心肌保护作用消失(P<0.05 vs IMPOC)。分别在IMPOC后即刻(0min),30min,60min,90min,120min检测胸段脊髓中n NOS和磷酸化n NOS(pn NOS)的含量,结果显示,与0min(100%)相比,30min和60min pn NOS含量分别增加了164%±9%,142%±6%(P<0.01),而n NOS含量并没有增加。与Control组相比,IMPOC组中NO,c GMP的含量在30min和60min明显增高(P<0.01)。在IMPOC前10min,鞘内分别脊髓NOS信号通路抑制剂L-NAME、7-NI、ODQ,结果显示,IMPOC增加脊髓中NO和c GMP含量的作用被阻断。另外,相关性分析发现MAP和c GMP具有正相关(γ=0.5,P<0.05),IS/AAR%和c GMP具有负相关性(γ=-0.54,P<0.05)。结论m阿片受体和n NOS/s GC/c GMP信号通路介导了IMPOC对大鼠IRI的心肌保护作用,其中吗啡可能是通过磷酸化n NOS蛋白启动n NOS信号通路。第二部分右美托咪定后处理对腹腔镜肾部分切除术患者缺血后肾脏的影响目的右美托咪定(Dexmedetomidine,DEX)作为一种新型的高选择性的α2受体激动剂,在临床中广泛应用。近些年的动物实验研究发现,DEX同样可以模拟IPOC在IRI中产生保护作用。此外动物实验发现,DEX后处理(Dexmedetomidine postconditioning,DPOC)在大鼠肾脏IRI模型中可以产生肾脏保护作用,但这一保护作用在人体中并未得到验证。本研究拟探讨DPOC对腹腔镜肾部分切除术(Laparoscopic partial nephrectomy,LPN)患者肾脏IRI是否产生保护作用。方法77例择期行LPN手术的患者入选了本次随机,双盲,对照性临床研究,电脑随机分组法分为DPOC组(39例)或者Control组(38例),DPOC组,在肾动脉开放即刻,给予0.6mg/kg的DEX,持续10min;Control组,在肾动脉开放即刻,给予0.9%的生理盐水,持续10min。观察指标:术中不同时点的MAP和HR;术前,术后2h和术后6h血浆性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(NAGL);术前,术后24h和术后48h尿液视黄醇结合蛋白(RBP);术前、术后1个月和术后6个月双肾血清肌酐,估算GFR值;术前、术后1个月和术后6个月患侧肾,对侧肾及双肾99m Tc-DTPA GFR值。其中术前、术后1个月和术后6个月患侧肾,对侧肾及双肾99m Tc-DTPA GFR值为最重要的观察指标。结果两组患侧肾GFR值在术后1个月和6个月都明显降低,术后1个月,与Control组(GFR值33.2±5.4 m L/min/1.73m2)相比,DPOC组(GFR35.7±4.9 m L/min/1.73m2)降低明显减少(P<0.05)术后6个月,两组之间的GFR值没有明显差异。与Control组相比,DPOC加快了肾动脉开放后MAP的恢复,在肾动脉开放10 min和30min后分别增加了5%and 6%(P<0.05)。与Control组相比,DPOC组血浆NGAL和尿液RBP明显降低(NGAL:术后2h 1027.0±72.8mg/L vs 837.9±79.0mg/L,术后6h1225.0±90.0mg/L vs 922.1±106.4mg/L,P<0.01;RBP:术后24h 0.44±0.17 vs0.67±0.2mg/L,P<0.01)。另外,术后患侧肾1个月的GFR值与术后6 h的NGAL值呈负相关(γ=-0.43,p<0.01);与术后24h RBP值呈负相关(γ=-0.39,p<0.05)。结论右美托咪定后处理对LPN患者造成的肾脏IRI具有保护作用。