论文部分内容阅读
本论文的研究来源于国家自然科学基金项目“麸炒山药炮制机理的研究”（项目批准号:30472192）,旨在通过比较研究山药麸炒前后多糖成分化学及药效学的变化,为阐明麸炒山药炮制机理及山药饮片的质量标准和临床应用提供一定的实验依据。本论文通过化学及药效学研究,探讨了山药麸炒前后多糖成分的差异。山药麸炒后总糖含量增加,经HPLC-ELSD分析山药麸炒前后粗多糖成分的单糖组成存在差异。药效学实验表明山药经麸炒后多糖成分总体作用优于生品。实验研究从以下三方面进行:一.化学研究1.采用苯酚-硫酸法对山药麸炒前后的粗多糖及精多糖进行含量测定及相应的方法学考察。生品粗多糖总糖含量为72.63%,得率为4.91%;麸炒品总糖含量为76.44%,得率为5.73%;而各精多糖总糖含量均可达到90%以上。2.采用考马斯亮蓝G-250法对粗多糖中的蛋白质进行了含量测定,结果显示:生品为0.23%,麸炒品为0.07%。3.采用HPLC-ELSD法测定粗多糖及精多糖的单糖组成,结果显示:山药生品及麸炒品均由鼠李糖和葡萄糖组成,山药生品及麸炒品的粗多糖及DEAE-52水洗脱部位精多糖的单糖组成摩尔比存在较大差异。生品的粗多糖中单糖组成的摩尔比为Rha:Glu=1:2.22,麸炒品为Rha:Glu=1:3.27;生品的DEAE-52水洗脱部位所得精多糖中单糖组成的摩尔比为Rha:Glu=1:2.04,麸炒品为Rha:Glu=1:3.47。4.采用Cellulose DEAE-52及Sephadex G-100分离纯化多糖,从生品中分离得到一个均质多糖SYS,运用HPLC-ELSD法测定其分子量为10,992Dal。同等条件下麸炒品未分离得到均质多糖。5.采用IR、1H-NMR、13C-NMR对SYS进行结构分析。推测出SYS可能是主链为1→4的α-D-葡聚糖。二.体内药效学研究1.从非特异性免疫、特异性体液免疫及细胞免疫三方面综合考察了山药多糖的免疫调节作用,结果显示:山药麸炒前后粗多糖成分均能显著增强环磷酰胺所致免疫低下小鼠的免疫功能。其中,血清溶血素实验及脾脏T淋巴细胞增殖实验结果显示,麸炒品作用优于生品。2.初步研究了山药麸炒前后粗多糖成分对大黄所致脾虚小鼠胃肠功能的影响,结果显示:山药及其麸炒品粗多糖均能显著抑制模型小鼠的胃排空率及小肠推进率,且脾脏指数和胸腺指数均显著增加,提示山药多糖有一定的补脾健胃作用,而调节免疫可能是其作用机制之一。3.首次采用流式细胞技术比较和研究了山药麸炒前后粗多糖对环磷酰胺所致免疫低下小鼠的外周血T淋巴细胞亚群水平的影响。三.体外药效学研究1.首次通过小鼠巨噬细胞细胞增殖实验发现山药粗多糖及精制多糖对小鼠单核巨噬细胞Raw264.7具有很强的增殖作用,且麸炒品的作用优于生品;通过细胞周期检测发现山药粗多糖及精多糖可增加经LPS诱导后的小鼠巨噬细胞的细胞周期中S期的含量,初步推测山药多糖可能是通过增加S期的含量达到其增殖细胞的作用;通过T-SOD、MDA、NO及IL-1β实验发现,山药多糖能显著增加小鼠巨噬细胞上清液中T-SOD活力,并显著降低MDA含量,能提高机体产生NO及IL-1β的能力,从而更好地保护机体细胞免受损伤,增强机体的免疫能力,且麸炒品的作用总体优于生品。2.首次通过星形胶质细胞增殖实验发现山药多糖对H2O2所致的星形胶质细胞的损伤具有很好的保护作用。