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尿酸酶(Uricase,URI)是代谢生物体内嘌呤的关键酶,可以催化氧化尿酸为尿囊素、二氧化碳和过氧化氢。血液中过量积累尿酸会导致痛风、高尿酸血症等高尿酸综合症状。因为人体缺乏尿酸酶,所以需要使用尿酸酶预防和治疗与高尿酸相关的疾病。过氧化氢酶(Catalase,CAT)可分解过氧化氢生成水和氧分子,清除过量的过氧化氢。将URI和CAT合用,既能清除体内过多的过氧化氢,防止细胞凋亡,降低过氧化氢的细胞毒性;又能为分解尿酸提供氧气,提高URI分解尿酸的能力。URI是蛋白质类大分子物质,存在易被酶降解、稳定性差、活性半衰期短及体内活性低等缺点。脂质体(Liposomes, LP)常被用作药物的包裹载体。脂质体膜与生物膜具有相似性,它能够提高药物稳定性,降低药物毒副作用和免疫原性,延长药物生物半衰期,提高被包封药物的生物利用度等优点,且具有一定的缓释和靶向效果。本研究构建了复合尿酸酶/过氧化氢酶脂质体( Liposomes containing URI and CAT,UCLP),考察了UCLP中URI的基本特性、稳定性、药物代谢动力学、药效学。而关于CAT研究内容主要包括以下几部分: 第一部分:采用逆向蒸发法制备UCLP,考察其形态,粒径分布, Zeta电位,包封率。结果显示:成功制备 UCLP,其形态呈类圆形, UCLP的粒径为(759.30±28.12) nm,ζ电位为(-8.49±3.18) mV,电导率为(954.00±23.30)μs/cm。包封率为(56.87±3.81)%。 第二部分:对UCLP的基本特性进行了初步考察,包括URI的最适pH、最适温度、米氏常数(Km)、游离酶(URI和CAT)与脂质体膜的作用及UCLP在280 nm处的荧光强度变化。UCLP中URI的最适温度为40℃,最适pH为8.0,米氏常数为13.40μmol/L,游离酶可能与脂质体膜有作用,URI和CAT经脂质体包裹后在280 nm处的荧光强度增加。 第三部分:考察了UCLP的热稳定性、贮存稳定性、酸碱稳定性、抗胰蛋白酶水解能力和抗化学试剂的能力。结果显示,在相同条件下, UCLP中URI的稳定性明显高于游离URI。UCLP抗化学试剂的能力也与游离URI不同。 第四部分:考察了 UCLP的在大鼠体内的药代动力学。大鼠静脉注射UCLP,然后通过测定URI的活性来考察其药代动力学特性。UCLP与游离URI相比,UCLP明显推迟了URI的达峰时间,增加了药时曲线下面积,提高了生物利用度。 第五部分:构建了小鼠高尿酸血症动物模型。UCLP降尿酸能力较游离URI强,UCLP能提高尿酸酶体内降尿酸能力。