奥沙利铂是广泛应用于结直肠癌化疗的关键药物，然而它却会导致严重的急性和慢性周围神经病变，并且常常伴随神经病理性疼痛。急性神经病变在给药后早期出现，主要症状包括肢体末端的感觉过敏和感觉异常，接触或暴露于寒冷环境，可诱发或增强疼痛程度。经历多个疗程的治疗后，患者大都会出现慢性神经病变。其主要特点是肢端麻木感和感觉迟钝，严重者甚至可有运动功能障碍。慢性神经病变是临床奥沙利铂化疗的剂量限制性副作用，往往导致化疗的中断，影响患者生存。抗抑郁药物被推荐作为治疗神经病理性疼痛的一线药物。其中，米氮平通过阻断中枢突触前自身和异源的α2肾上腺素能受体，同时加强对去甲肾上腺素能和5-羟色胺能的神经传导，具有独特的药理学性质，而被称为去甲肾上腺色能和特异的5-羟色胺能抗抑郁药。得到增强的5-羟色胺能神经传导主要是通过5-HT1受体介导，因为米氮平能阻断5-HT2和5-HT3受体。这一药理特性使得米氮平具有不同的临床特点，与选择性5-羟色胺再摄取抑制剂相比，起效更快，眩晕、恶心呕吐、性功能障碍等不良反应发生率降低。特别是近年来，大量的随机对照研究证实，米氮平对神经病理性疼痛具有有效地治疗作用。抗惊厥药物是IASP推荐的神经性疼痛治疗二线药物。普瑞巴林及其结构类似的加巴喷丁已经成为带状疱疹后神经痛和糖尿病周围神经病变可选择的治疗药物之一，普瑞巴林对纤维肌痛的有效性也已被报道。一些动物实验的行为学研究显示普瑞巴林能够抑制机械触觉异常和寒冷诱发的痛觉过敏。目前普遍认为这一治疗作用是基于普瑞巴林能结合电压依赖性Ca2+通道α2δ-1亚基影响钙离子内流，从而阻断了痛觉过敏和中枢敏化的发展。第一部分不同剂量与给药方案对奥沙利铂诱发神经病理性疼痛的影响目的：临床采用的奥沙利铂化学疗法易产生外周感觉神经病变，并常伴随着神经病理性性疼痛。本研究的目的是确定不同奥沙利铂的剂量和给药方案，在大鼠模型中对神经病理性疼痛发生的影响。方法：首先，采用四种不同剂量（1、2、4、8mg/kg）的奥沙利铂对Sprague-Dawley大鼠进行腹腔注射，每隔1天注射1次，共8次注射（总剂量分别为8、16、32、64mg/kg）。随后，固定采用4mg/kg剂量的奥沙利铂，以三种不同的给药方案分别行大鼠腹腔注射：（1）4mg/kg，连续8天；（2）4mg/kg，每周2次，连续4周；（3）4mg/kg，每隔1天1次，共8次注射。分别记录大鼠的体重和死亡率等一般情况，定期测试大鼠对不同刺激的行为学反应，包括冷/热痛觉过敏和触觉痛觉异常。结果：腹腔内分8次注射总剂量为32和64mg/kg的奥沙利铂，均可在大鼠成功诱导冷痛觉过敏和触觉痛觉异常；16mg/kg的剂量则仅能引起冷痛觉过敏；而8mg/kg组大鼠行为学与空白对照组无明显异常；所有组大鼠均未出现热痛觉过敏。64mg/kg组大鼠的死亡率明显高于其他组。多次腹腔注射奥沙利铂的间隔时间越短，大鼠的神经病理性疼痛程度越重，持续时间也相应地越短。结论：我们的研究结果表明,大鼠4mg/kg奥沙利铂腹腔内注射，每周2次、连续4周，是一个合适的神经病理性疼痛动物模型，可用来模拟临床病人奥沙利铂化疗中发生的疼痛症状。第二部分米氮平对奥沙利铂导致的神经病理性疼痛的影响目的：奥沙利铂化疗可引起急性和慢性周围神经病变并伴发神经病理性疼痛。米氮平，作为抗抑郁剂，也用于治疗神经性疼痛。本研究旨在探讨米氮平对奥沙利铂引起的神经病理性疼痛的疗效及可能的潜在机制。方法：首先，Sprague-Dawley大鼠4mg/kg奥沙利铂腹腔内注射，每周2次、连续4周；同时分四组每天分别给予大鼠口服安慰剂和米氮平10、20、30mg/kg，28天后评价对神经病理性疼痛治疗效果。随后，重新选取SD大鼠制模，在给予米氮平20mg/kg/day灌胃前30min腹腔注射1mg/kg选择性5-HT1A受体拮抗剂WAY100635，连续应用28天后评价治疗效果。行为学测试包括冷痛觉过敏和触觉痛觉异常，同时应用western-blotting检测NMDA受体亚单位NR2B在腰段脊髓的表达。结果：腹腔内注射奥沙利铂，每周2次、连续4周，可引起大鼠明显的冷痛觉过敏和触觉痛觉异常和脊髓NMDA受体NR2B亚基的表达上升；连续28天给予米氮平20或30mg/kg/day，明显降低奥沙利铂引起的触觉痛觉异常，逆转了脊髓NR2B亚基的表达上升，但是对于大鼠的冷痛觉过敏未见明显改善。预先给予WAY100635可以逆转米氮平的治疗效应。结论：我们的研究结果表明，奥沙利铂引起的触觉痛觉异常与脊髓NR2B表达增高有关，米氮平可能通过5-HT1A受体减轻触觉痛觉异常和NR2B表达上调；但米氮平对冷痛觉过敏无明显改善。第三部分普瑞巴林对奥沙利铂导致的神经病理性疼痛的影响目的：奥沙利铂是第三代铂化合物化疗药物，对转移性结直肠癌具有显著疗效，但它会引起患者急性和慢性神经病变。普瑞巴林作为一种抗癫痫药物，也用于治疗神经病理性疼痛。本研究的目的是探讨普瑞巴林对奥沙利铂引起的神经病理性疼痛的作用以及可能的潜在机制。方法：Sprague-Dawley大鼠4mg/kg奥沙利铂腹腔内注射，每周2次、连续4周，建立奥沙利铂引起神经病理性疼痛模型。同时给予大鼠普瑞巴林灌胃，剂量分别为5、10、20、40mg/kg，2次/天，连续给药28天。通过冷痛觉过敏和触觉痛觉异常行为测试评价普瑞巴林的治疗效应，应用western-blotting检测腰段脊髓中NMDA受体NR2B亚基和L4-L6背根神经节中瞬时受体电位melastatin8（transient receptor potentialmelastatin8，TRPM8）的表达。结果：腹腔内注射奥沙利铂，每周2次、连续4周，可引起大鼠明显的冷痛觉过敏和触觉痛觉异常，以及腰段脊髓NMDA受体NR2B亚基和背根神经节中TRPM8的表达上升；给予普瑞巴林治疗可减轻冷痛觉过敏和TRPM8的表达上调，但对触觉痛觉异常和NR2B改变无明显影响。结论：我们的研究结果表明，奥沙利铂引起的冷痛觉过敏与背根神经节中TRPM8的表达上调有关；普瑞巴林可减轻冷痛觉过敏与TRPM8上调，但对触觉痛觉异常和NR2B高表达改变无效。总结本研究通过腹腔注射奥沙利铂建立大鼠神经病理性疼痛模型，研究了不同的给药剂量与给药方案对神经病理性疼痛发生和进展的影响，并检测了背根神经节与脊髓中与特定类型疼痛相关的蛋白受体的表达改变，对其作用机理进行了探讨。研究发现，抗抑郁药物米氮平20和30mg/kg/day可显著减轻奥沙利铂引起的触觉痛觉异常，其可能机制为通过激活5-HT1A受体逆转NR2B表达上调；抗惊厥药物普瑞巴林可剂量依赖性地缓解冷痛觉过敏，这一作用与其降低了背根神经节中TRPM8的表达有关。