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戊型肝炎是发展中国家的一种主要的急性肠道传染病。其在孕妇感染者的病死率却可高达20%,尤其是后3个月的妊娠晚期者最高可达56%。1986~1988年间我国新疆南部的HEV大流行造成了12万人发病,千余人死亡。目前,越来越多的证据表明戊型肝炎是一种人畜共患病。其危害日益被人们所重视。但由于至今尚未建立有效的HEV细胞培养模型或简便的病毒繁殖模型,国内外学者对戊型肝炎病毒的发病、致病机理和疫苗的研究都相对缓慢。HEV是一种无包膜二十面体对称结构RNA病毒,其主要免疫表位集中在病毒衣壳,由ORF2编码的单一蛋白。在大肠杆菌中表达的ORF2的一个片段(NE2)可以自发形成以二聚体为基础的多种聚合结构,二聚体蛋白与病人血清的反应性显著强于单体蛋白,提示二聚体蛋白形成了HEV的重要免疫优势表位。NE2蛋白免疫恒河猴可以对HEV产生完全的保护性。本研究用分析超离技术测得NE2蛋白在溶液中主要形式的沉降系数为2.65S,分子量为46kDa,摩擦比为1.69,提示为中度不对称性的二聚体形式。基于上述研究结果,本研究用NE2抗原制备了多株单克隆抗体,其中6株对二聚体的反应性强于单体,提示识别构象型表位;2株对二聚体、单体及变性蛋白的反应性相当,提示识别线性表位。进一步,我们通过体在体外用MAb进行HEV的免疫捕获PCR,证实MAb 8C11、13D8和8H3能够直接捕获病毒,提示它们识别病毒颗粒表面的暴露结构。通过ELISA及生物传感器验证这三株MAb的交叉阻断实验发现,8C11和13D8可以相互完全阻断,提示识别同一表位区域,而13D8对8H3不能阻断,8C11非但不能阻断8H3,而且对8H3的结合有显著增强作用。利用Biacore生物传感器测定这3株MAb及其Fab的亲和常数(KD),8C11和13D8的KD值均为20nmol/L左右,其Fab片段的KD值较完整抗体有数十倍的提高,可解释为完整抗体的二价效应;MAb 8H3的KD值为1 000nmol/L左右,但其Fab的KD值降低了105,提示Fab可以更容易地接近抗原表位并与之结合,意味着E2抗原上的8H3表位被其他结构所部分遮盖,而8C11与抗原的结合可能引起了抗原空间结构的改变,从而去除了对8H3表位的遮盖,导致8H3与抗