论文部分内容阅读
非病毒DNA递送系统(nonviral DNA delivery system)已经成为基因治疗的有力工具。良好的非病毒DNA递送系统应该能够有效地穿透细胞膜，并把DNA转运到靶细胞内部。非病毒DNA递送系统的详细转运机制目前还不太清楚，但它们都涉及到DNA缩合(DNA condensation)过程——被递送的DNA都要经历一个塌陷缩合成紧密有序的，仅由一到几个DNA分子组成的纳米微粒的过程。研究表明DNA缩合能够提高DNA的物理化学稳定性；另外由于可以使DNA缩合体表面的zeta电位为正值，而细胞表面带负电荷，使得DNA缩合体(DNA condensates)的转染效率大大提高。本研究的目的是利用DNA缩合技术把反义核苷酸(Antisense oligodeoxynucleotides，ASON)递送到肿瘤细胞内部。这种反义核苷酸能够与人端粒酶逆转录酶的mRNA(human telomerase reverse transcriptase mRNA，hTERT mRNA)互补，抑制人端粒酶逆转录酶的表达，从而在基因水平上达到抑制肿瘤的目的。 本研究分为三部分。第一部分考察了聚赖氨酸(Poly-L-Lysine，PLL)诱导的反义核苷酸缩合，研究了各因素对缩合体的影响。第二部分设计了一条含有16个赖氨酸和一个NGR功能基团的多肽，制备了反义核苷酸靶向纳米缩合体。此NGR功能基团含有的NGR基序是氨基肽酶配体，能够靶向新生血管内皮细胞。第三部分的细胞学初步研究证明反义核苷酸靶向纳米缩合体能够有效地转染肿瘤细胞。