五味子HG型果胶的甲酯化位点研究

来源 :东北师范大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:zhengjiaxun2010
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五味子(Schisandra chinensis(Turcz.)Baill)为木兰科五味子属植物,有敛肺止咳、滋补涩精、止泻止汗之效。水溶性多糖是五味子的有效活性成分之一,尤其是果胶多糖。果胶是构成植物细胞壁的主要成分之一,也是自然界一类结构复杂的生物大分子。不同类型的果胶生理功能及药理活性差异较大,因此明确果胶的结构特点是研究果胶构效关系的基础。本研究首先制备了五味子果胶多糖,然后对其中主要的HG型果胶的结构特征进行了分析,取得的研究结果如下:采用DEAE-Cellulose离子交换层析法对五味子多糖SCP进行分级,得到蒸馏水洗脱的中性糖级分SCPN和0.5 M NaCl溶液洗脱的果胶级分SCPA。单糖组成分析结果显示,SCPA主要由GalA构成,此外还有少量的Glc、Gal、Rha和Ara。13C NMR谱及TBA定性检测实验结果表明,SCPA主要由HG型果胶结构域组成,还含有少量的RG-I和RG-II型果胶结构域。同时,13C NMR谱和FT-IR谱的结果表明,SCPA中的HG结构域具有较高程度的甲酯化,不具有乙酰化修饰。为了对五味子果胶中主要的HG结构域进行分析,采用Endo-Polygalacturonase M2(EC 3.2.1.15)对五味子总果胶SCPA进行酶解。产物利用Sephadex G-50凝胶层析柱层析分级,得到分子量均一的四个级分SCPA-PG1、SCPA-PG2、SCPA-PG3和SCPA-PG4。单糖组成分析结果表明SCPA-PG1为分子量较大的RG-I结构域,SCPA-PG2为RG-II结构域,SCPA-PG3和SCPA-PG4为HG型果胶降解产生的寡糖片段。利用ESI-IT-MS分别对这些HG寡糖片段进行一级和二级质谱分析明确了HG寡糖片段中甲酯基的位置。进一步利用层析法从五味子总果胶SCPA中分离纯化出一个GalA含量在90%以上的高纯度HG型果胶结构域。通过酶解及ESI-IT-MS初步推测出了五味子中HG型果胶的结构模型。
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