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禽流感病毒（Avian Influenza Virus，AIV）是禽流行性感冒（简称禽流感，Avian Influenza，AI）的病原。其中高致病性的H5N1亚型AIV可以造成鸡群的大批死亡，对家禽养殖业影响严重，并可引起人的感染和死亡。AIV基因组为8节段负链RNA，共编码10种与病毒结构和功能关的蛋白质，其中核蛋白（Nucleoprotein，NP）和基质蛋白（Matrix protein，M）具有型特异性，是AIV分型的依据：血凝素（Haemagglutinin，HA）是AIV囊膜纤突的主要成分之一。 本试验利用pBlueBacHis2A杆状病毒载体在昆虫细胞中表达H5亚型AIV的HA和HA1，通过Western Blotting证明了表达产物具有抗原性，且不与鸡、鸭的H7和H9亚型的抗血清发生交叉反应。Dot-ELISA结果显示，表达的HA1可以在非变性条件下与相应抗体作用，表现良好的抗原性。通过对15个亚型（H1～H15）AIV代表毒株的HA1、HA2氨基酸序列一致性的分析表明：15个亚型中HA1氨基酸序列一致性为9.4％～40.2％，HA2氨基酸序列一致性为29.8％～92.7％，HA1是各H亚型间差异的主要区域；同时已有研究证明H5亚型AIV的HA分子结构中所有抗原表位都位于HA1区域，因此初步认为利用HA1作为检测抗原比HA全长更具有优势。 本试验利用pET-30a（+）原核表达载体在大肠杆菌BL21（DE3）中表达AIV的M1，利用6个组氨酸同Ni2+亲和层析技术得到纯化M1。通过Western Blotting证明表达产物具有抗原性，可作为检测抗原来检测鸡和鸭的H5、H7、H9亚型AIV抗血清。同时利用pET-30a（+）原核表达载体分别在大肠杆菌BL21（DE3）pLysS和Rosetta（DE3）pLysS中表达AIV的NP，在补充稀有密码子的Rosetta（DE3）pLysS中NP的表达量明显高于在BL21（DE3）pLyss。Ni2+亲和层析得到纯化的NP，同样可以作为检测抗原来检测鸡和鸭的H5、H7、H9亚型AIV抗血清。 利用本试验表达的HA1、HA作为检测抗原，可应用于H5亚型AIV抗血清的检测，NP、M1可以作为A型AIV抗血清的检测。同时“M1-鸭AIV抗血清-HRP标记兔抗鸭抗体”检测鸭抗血清的方式在国内外尚未见报道，这将对鸭AIV血清学的检测和监测具有重要的意义。